2025年新人教版高考生物一轮复习讲义 第十单元　专题突破10　综合PCR的基因工程问题.pptxVIP

;阐述常规PCR、重叠延伸PCR、荧光定量PCR等的过程与原理，举例说明不同的PCR技术有着不同的应用。;;典例突破;典例突破;据图分析可知，第一轮复制形成2个DNA分子，即①②各一个，A正确；

第二轮复制得到22＝4(个)DNA分子，即①复制得①和③、②复制得②和④，即得到①②③④各一个，B正确；;第四轮复制得到16个DNA分子，其中有8个⑤(X基因)，C错误；

经五轮循环后共形成32个DNA分子，其中①②各一个，③④各四个，22个⑤，故产物中有五种不同的DNA分子，D正确。;;2.(2019·江苏，33节选)为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图示

为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应

位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是______。

某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的

质粒中扩增出了400bp片段，原因是_________

________。;分析题图可知，理论上可以选择的引物组合有甲和丙、乙和丙两种情况。如果选择甲和丙这对引物，则无论目的基因是否正确插入，扩增的片段都是50＋300＋100＝450(bp)，不符合要求；如果选择乙

和丙这对引物，正向连接和反向连接后所得结果不同，

所以应选择乙和丙这对引物进行PCR鉴定。如果目的

基因和质粒反向连接，则引物乙会出现在重组质粒的

外侧，此时若加入引物甲和乙，则可以扩增出300＋

100＝400(bp)的片段。;重叠延伸PCR技术是指在PCR技术的基础上，采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成了重叠链，通过重叠链的延伸，将不同来源的片段重叠拼接起来的一项新技术。该技术在基因的定点突变、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有着独特的应用。;3.水蛭素是一种蛋白质，可用于预防和治疗血栓。某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水蛭素基因中的特定位点引入特定突变，使水蛭素第47位的天冬酰胺(密码子为AAC、AAU)替换为赖氨酸(密码子为AAA、AAG)，从而提高水蛭素的抗凝血活性。原理如图。

注：图中的引物2和3的突起处代表与模板链不能互补的突变位点。;(1)由以上事例可知，要对蛋白质的结构进行改造，需要通过______

__________________来完成。

(2)若拟突变位点的碱基对为A－T，则??要让其突变为______________才能达到目的。引物2的突变位点(突起处)应设计为________(假设引物为单链DNA)。;若拟突变位点的碱基对为A－T，则需要让其突变为T－A或C－G，对应的密码子由AAU变成AAA或由AAC变成AAG，可使天冬酰胺替换为赖氨酸。;(3)在第一阶段获得2种具有重叠片段DNA的过程中，引物1、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生____种DNA分子。该阶段必须将引物1、2和引物3、4置于不同反应系统中，这是因为__________________________

________________________________。;若两个反应系统均进行一次复制，则会产生3种不同的DNA分子，因为引物1和4产生的DNA分子是一样的。;(4)利用重叠延伸PCR技术还可以将两个不同来源的DNA片段拼接起来。有人想利用该技术把基因M和N拼接在一起，设计基因M的引物M1、M2，基因N的引物N1、N2。在设计这4种引物时，特别要注意的问题是______

___________________________________________________________。;重叠互补引物的设计是重叠延伸PCR技术成功的关键。拼接基因M和N时，设计引物时需要注意的是，需要找到两种基因的重叠部分，即M1、M2中的一种引物与N1、N2中的一种引物必须具有互补配对的片段。;利用PCR技术进行基因扩增时，为了便于设计引物，要求目的基因两侧的序列是已知的。当DNA的某些序列已知，而需要扩增已知序列两端的未知序列时，可采用反向PCR技术。;4.(2020·江苏，33节选)如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如图(以EcoRⅠ酶切为例)：;请据图回答问题：

(1)步骤Ⅰ用的EcoRⅠ是一种______

________________酶，它通过识别特定的___________切割特定位点。;(2)步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3′－羟基与5′－磷酸间形成____________；PCR循环中，升温到95℃是为了获得______

______；TaqDNA聚合酶的作用是催化___________________________。;?;PCR过程中，根据已知的DNA序列合成两个引物，要注意模板