人源过氧化氢酶的检测.pdfVIP

实验四人源过氧化氢酶的检测

实验目的

1、掌握酵母发酵液涂片和显微镜镜检的操作技术

2、掌握斑点杂交法（Dotblot）鉴定人源过氧化氢酶的方法

3、掌握钼酸铵法检测过氧化氢酶活性的原理和操作

实验材料

过氧化氢酶标准品（1000U/mL）和待测样品

Dotblot:过氧化氢酶抗体（Mousemonoclonalantibody）、

辣根过氧化物酶标记二抗(Goatanti-mouseIgGHRP)、

α-萘酚

钼酸铵法:过氧化氢、硫酸、柠檬酸、钼酸铵、PBS

NC膜、EP管、96孔板、移夜器

显微镜、酶标仪、脱色摇床

发酵液涂片镜检

吸取发酵液，滴一小

火焰上烘干小水流冲洗

滴于载玻片上

显微镜下观察：

1.有无杂菌污染；

覆上盖玻片再次烘干

2.酵母形态，并找到出芽生

殖中的酵母

细菌污染

发酵液镜检:

有无杂菌污染

霉菌污染

正常状态

酵母出芽生殖发酵液镜检结果

酵母

（出芽生殖）

手机拍摄

×400

显微镜的使用目镜

（10×，20×）

100X40X10X

物镜（10×，40×，

100×）

载物台

准焦螺旋

光源

显微镜的放大倍数

=目镜倍数×物镜倍数

Substrate

斑点杂交原理

Targetprotein

Nitrocellulosefiltermembrane

PrimaryantibodySecondaryantibody

conjugateconjugate

斑点杂交操作步骤点样顺序

样品点样于NC膜

加入封阻液2mL，