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(完整word版)2015动物细胞培养技术实验报告

一、实验目的

1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。

2、学习并掌握细胞传代培养的方法。

3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。

二、实验原理

细胞培养（cellculture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。

动物细胞培养（animalcellculture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单

个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。

由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。

动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。

原代培养（primaryculture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用

胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方

法。

传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单

细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。

高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功

能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的

多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可

以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，

因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、

生物技术、基因工程等研究领域。

三、细胞培养相关设施及材料

1、细胞培养室

无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。

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孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO。

2

制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。

储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。

清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。

2、细胞培养常用基本设施：

荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤

器等。

细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧

杯、量筒等。

3、细胞培养用品的清洗、消毒

新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗：

硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水；

冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。

所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工作台后打开包

装。

消毒灭菌：高压蒸汽灭菌（120℃，20min）；紫外线消毒：主要用于实验室房间空气及操作台。

四、细胞培养用液及培养基

1、培养用液：水（高度纯净）；缓冲液：平衡盐溶液，维持渗透压，调节PH值，供给细

胞生存所需能量和无机离子成分；消化液：胰蛋白酶液，EDTA，胶原酶等。

2、培养基：维持体外细胞培养生存和生长的溶液。

（1）天然培养基：血清（胎牛血清、小牛血清、马血清、兔血清、人血清等）、血浆和组

织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）水解乳蛋白；

（2）合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成。如TC199、

BME、MEM等。主要成分：氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其他一些辅助物质。

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五、动物细胞培养的条件

（1）无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加

入一定量的的抗生素，以防被污染。此