《GBT 42077-2022生物技术 核酸靶序列定量方法的性能评价要求 qPCR法和dPCR法》.pptx

《GB/T42077-2022生物技术核酸靶序列定量方法的性能评价要求qPCR法和dPCR法》最新解读;目录;目录;目录;目录;目录;目录;PART;定量方法规范化;标准的重要性;PART;随着生物技术的快速发展，核酸靶序列定量方法在医学、生物学等领域得到广泛应用。;定量方法要求;;PART;;将样本分配到大量微小反应单元中，进行独立的PCR扩增，通过泊松分布原理计算目标序列的拷贝数。;PART;;;PART;qPCR法;;标准的意义和影响;PART;;原理;PART;基于荧光标记;基于荧光标记;PART;qPCR法;dPCR法;PART;特异性;短链非编码RNA（如microRNA）长度较短，设计特异性引物和探针具有挑战性。;PART;;dPCR法在生物来源核酸定量中的应用;PART;qPCR法在无细胞生物液体样本定量中的应用;样本处理与分区;样本处理与保存;PART;需确保qPCR法测定结果的准确性和可重复性，包括标准曲线的制备、样本的处理和数据分析等。;;PART;;;PART;使用已知浓度的病原体核酸标准品，制备一系列浓度的标准曲线。;RNA提取与反转录;实例三：转基因生物鉴定;PART;极限检测能力;无需标准曲线;;;PART;比较Ct值法;qPCR能够检测到极微量的核酸模板，对于低表达量的基因也能进行准确定量。;qPCR需要已知浓度的标准品来建立标准曲线，对于某些稀有或未知浓度的样品，标准品的制备可能较为困难。;;PART;;实验步骤;准确性;PART;核酸提取的效率直接影响后续定量分析的准确性，因此必须保证提取效率的稳定和可靠。;qPCR和dPCR法应能够准确地定量目标核酸序列，确保结果的准确性和可靠性。;PART;通过测定核酸在260nm和280nm处的吸光度，计算A260/A280比值，评估核酸纯度。;核酸完整性的评估;PART;;dPCR试验设计;提高扩增效率;PART;生物信息学工具用于分析qPCR和dPCR扩增产物的序列，以确认目标序列的特异性。;评估方法性能;;PART;样品采集与处理;;数据处理与分析;PART;qPCR和dPCR方法应准确测量目标核酸序列的数量，其误差应在可接受范围内。;阈值设置;PART;便于数据挖掘;将数据线性缩放到[0,1]区间，该方法简单易懂，但容易受到极端值的影响。;;PART;;;PART;;线性评估;PART;通过比较样品信号与噪音信号的大小，确定能够准确测量的最低浓度或数量。;检出限（LOD）的确定;PART;样品选择;;PART;计量???源性定义;保障生物安全;;PART;随机效应导致的不确定度;;;通过测量不确定度可以评估检测结果的准确性和可靠性。;PART;用于实时监测PCR扩增过程中的荧光信号，从而确定核酸靶序列的初始浓度。;;仪器应具有高精度和高准确度，以确保测量结果的可靠性。;PART;荧光定量PCR仪的选型;实验准备;PART;药物疗效评估;利用qPCR技术可以快速、准确地检测出食品中是否含有转基因成分，为食品安全提供保障。;基因突变筛查;PART;核酸提取仪的选择;;PART;;绝对定量能力;PART;;;PART;激光校准纸可以用于校准光谱仪、分光光度计等仪器的波长和光强度。;研究分子结构;PART;qPCR法;医学诊断;提高核酸提取效率、优化反应条件和降低假阳性和假阴性率等仍是当前面临的挑战。;PART;高灵敏度检测;个性化医疗;;PART;高灵敏度;;PART;;;临床诊断;PART;;;PART;利用显微镜对细胞进行直接计数，包括血细胞计数板、流式细胞仪等方法。;;关联分析;PART;基本原理;基本原理;准确度;PART;;;;通过qPCR或dPCR技术检测药物代谢相关基因变异，指导个体化用药剂量和方案。;PART;转基因食品标识;qPCR法;;PART;;绝对定量;灵敏度与精确度;PART;遵守国家及地区关于生物技术、核酸检测和靶序列定量的相关法规和标准。;;PART;;精确度;PART;;标准的实施可以提高核酸检测的准确性，减少误判和漏判。;;技术创新;THANKS