2021年扫描电子显微镜生物样品制备与观察细胞生物学实验报告.pdf

细胞生物学试验汇报

扫描电子显微镜生物样品制备与观察

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【试验目】

1、了解扫描电镜基础结构与工作原理

2、了解扫描电镜基础使用方法

3、了解临界点干燥仪工作原理了解扫描电镜生物样品制备基础过程

【试验原理】

扫描电镜关键用于观察样品表面几何形貌。通常扫描电镜生物样品制备过程包含取材、

固定、脱水、干燥以及导电处理等步骤。取材时应尽可能保护待观察样品表面（如细胞表

面、组织或器官上皮表面等）,而且避免样品表面在清洗过程中人为损伤。通常生物样品

需经干燥后才能在扫描电镜下观察。因为表面张力作用,含水量大生物样品在自然干燥过程

中,其表面形貌将发生严重变形。

为了观察生物样品真实表面形貌,通常采取临界点干燥法对样品进行干燥处理。当气液

两相处于临界点时,气体、液体密度相等,表面张力为零。所以,对生物样品进行临界点

干燥,能够很好地保护其表面形貌。水临界温度和压力分别为374.1℃和218.3大气压,显

然,此条件下生物样品将受到严重损坏。因为CO2临界温度和压力较低,为31.4℃和72.9

大气压,故通常选择CO2作为生物样品临界点干燥工作介质。固定、脱水后样品需经过乙

酸异戊酯处理,然后利用临界点干燥仪对样品进行干燥。

因为生物样品导电性低,未经过导电处理样品在扫描电镜下观察时会产生荷电现象,

从而影响观察和摄影统计。为了降低荷电效应,对生物样品表面要进行导电处理,通常使用

离子溅射仪在样品表面喷镀金属导电薄层。喷镀金属包含:金（Au）,铂（Pt）及其合金等,

喷镀导电薄层厚度在10nm左右为宜。对于花粉粒等含水量较少生物样品,能够经过自然干

燥后在扫描电镜下观察。入射电子术与固体样品原子之间相互作用

1、入射电子术与固体样品原子之间相互作用。

含有一定能量电子入射固体厚样品后收到样品原子散射,产生二次电子、背散射电子

以及特征x射线等。二次电子是从样品表面约10nm深度范围内被入射电子激发低能电子,其

能量约为0~50eV。一部分入射电子在样品内部经数次散射后从样品表面射出,这些电子被

称为背散射电子。样品中不一样元素原子在受到入射电子电离激发时能够发射特征X射线。

扫描电镜关键是利用二次电子像观察厚样品表面形貌。在观察样品微区表面形貌同时,利用

X射线显微分析技术能够对样品中元素进行定性和定量分析。

2、扫描电镜基础组成和成像过程

扫描电镜成像系统基础组成由图1-1所表示。电子枪、聚光镜和物镜等组成扫描电镜

电子光学系统。电子枪发射电子经聚光镜和物镜会聚作用形成极细电子束入射样品。在扫描

偏转线圈控制下,入射电子束在样品表面做光栅状扫描。扫射过程中产生二次电子由光电倍

增管检测,该信号经视频放大器放大后输入观察显示器栅极以调制其亮度。因为入射电子束

与观察显示器扫描偏转线圈均由同一扫描信号发生器控制,所以二者扫描同时。当入射电子

束对样品某区域扫描时,在显示器上能够观察到该区域二次电子像。像点亮度与样品物点上

所产生二次电子信号强度相关。当来自物点二次电子信号强时,对应像亮点;反之则暗。

3、扫描电子显微镜技术指标

分辨率、加速电压和放大倍数是扫描电镜基础技术参数。扫描电镜分辨率通常指二次

电子像分辨率,该分辨率与入射电子束斑直径相关。配置热发射电子枪扫描电镜分辨率约为

3nm,而高分辨率场发射扫描电镜分辨率在1nm左右。扫描电镜加速电压范围约为1-20kV。

扫描电镜放大倍数由观察显示器尺寸与入射电子束在样品扫描区域尺寸之间比值决定。经过

改变入射电子束扫描区域大小,能够提升或降低放大倍数,其范围为数十倍至数十万倍。

4、二次电子像衬度机制

二次电子产率η定义为二次电子数与入射电子数之间比值,而且η∝1／cosθ,θ为

入射电子束与样品表面法线之间夹角。因为样品表面不是平整,各点θ值与η值不一样,即

样品表面各点二次电子信号强度不一样。所以二次电子像衬度反应样品表面几何形貌。另外,

因为入射电子束孔径角很小,二次电子像还含有景深大,立体感强特点。

【试验器材】

（

1）试验仪器

扫描电镜、离子溅射仪

（2）试验材料