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胃癌耐药研究中二维电泳凝胶显色方法的分析

【摘要】目的分析利用蛋白质组学方法研究胃癌耐药相关蛋白质中双向电

泳凝胶的染色显示。方法培养胃癌细胞SGC7901和长春新碱诱导的耐药胃癌细

胞SGC7901/VCR，用双向凝胶电泳技术分离总蛋白，银染及胶体考马斯亮蓝染

色，ImageScanner扫描仪扫描凝胶。结果获得了背景清晰、重复性好的双向凝

胶电泳图谱，两种染色凝胶相比，硝酸银染色在样品少时显示更佳，过量则影响

图像质量，而胶体考马斯亮蓝染色在上样量增加时的凝胶蛋白质点数目及丰度均

增加，并无明显拖尾。结论两种显色方法受样品量影响较大，恰当选用有利于

通过蛋白质组学研究胃癌耐药机制工作的进一步开展。

【Abstract】ObjectiveToinvestigatestainingmethodsfortwo-dimensional

gel(2-DE)electrophoresisinmultidrugresistanceofgastriccancer.MethodsCultured

vincristine-resistanthumangastriccancercelllineSGC7901/VCRanditsparental

celllineSGC7901．Variantamountproteinofthosecellswereseparatedby2-DE.Gels

werestainedwithsilvernitrateorcolloidalCoomassiebrilliantblue,andscannedby

ImageScanner.ResultsWell-resolved,reproducible2-DEpatternsofSGC7901/VCR

andSGC7901wereestablished.Silverstainingwasbetterwhenproteinsample

amountwaslow，overloadedproteinwillinterfereresolutionofthemaps.Gelsstained

withcolloidalCoomassiebrilliantbluehadmoreproteinspotsnumbersand

abundancewithoutapparenttrailswhenincreasedloadingproteinsample.Conclusion

Twostainingmethodswereinfluencedlargelybythesumofproteinsamples，

properlyselectionmaybehelpfulforfurtherstudywithproteomicsinmultidrug

resistanceofgastriccancer.

【Keywords】Vincristine；Gastriccancer；Multidrugresistance；

Two-dimensionalgelelectrophoresis；Staining

胃癌是常见的消化道肿瘤，确诊时多属中晚期，单纯手术效果较差，多需结

合化疗，尽管目前已有多种化疗药物可供临床选择，而多药耐药仍是影响胃癌治

疗的重要因素。有关耐药的具体机制尚不完全清楚，蛋白质组学是目前此方面研

究的重要手段，双向凝胶电泳则是此新兴学科的支柱技术之一。为进一步明确胃

癌多药耐药机制，我们分析了获得胃癌细胞SGC7901和长春新碱诱导的耐药胃

癌细胞SGC7901/VCR的双向凝胶电泳图谱的不同显色方法，为下一步研究工作

的开展奠定基础。

1材料与方法

1．1材料

1．1．1试剂丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷、甘氨酸、

十二烷基磺酸钠(SDS)、超纯尿素、CHAPS购自Promega。2-DE蛋白定量试剂

盒(2-DQuantKit)、IPG缓冲液pH3-10及24cm固相化pH梯度干胶条pH3~10、

覆盖液均购自AmershanPharmacia公司。二硫苏糖醇(DTT)、碘乙酰胺购自