第三章酶的分离纯化.pptxVIP

第三章酶的分离纯化酶是生物催化剂，在工业和科研领域发挥着重要作用。酶的分离纯化是研究和应用酶的基础，也是生物技术的重要组成部分。hdbyhd

概述酶的结构酶是具有催化活性的蛋白质，由氨基酸组成，具有特定空间结构。酶的活性酶具有催化活性，能加速生物化学反应，但本身不参与反应。酶的特异性每种酶只能催化特定类型的底物，并产生特定的产物。酶的功能酶参与生物体内的各种生命活动，如代谢、能量转换和信号传导。

酶的分离纯化的重要性提高酶的活性纯化的酶具有更高的活性，可以更有效地催化反应，提高生产效率。降低成本去除杂质，减少副反应，提高酶的利用率，降低生产成本。研究酶的性质分离纯化的酶可以进行更深入的研究，例如酶的结构、功能、动力学参数等。促进酶的应用纯化的酶可应用于医药、食品、化工等各个领域，推动相关产业的发展。

影响酶分离纯化的因素酶的性质酶的种类、分子量、稳定性等性质会影响分离方法的选择。溶液条件溶液的pH值、离子强度、温度等都会影响酶的活性及稳定性。杂质的存在杂质的存在会影响分离效率，例如，蛋白质、多糖等会影响酶的纯度。分离方法的选择合适的分离方法可以提高效率，例如，离心、层析、电泳等。

酶分离纯化的一般步骤1粗提取细胞破碎和初步分离2纯化去除杂蛋白和污染物3浓缩提高酶浓度，便于保存4纯度检测验证酶纯度和活性酶分离纯化是制备纯净酶的必要步骤，可用于酶的结构与功能研究、酶的应用开发等。一般步骤包括粗提取、纯化、浓缩和纯度检测。

离心法离心法是根据物质密度差异，利用高速旋转产生的离心力来分离不同物质的一种方法。在酶的分离纯化中，离心法常用于去除细胞碎片、沉淀蛋白质等，使酶溶液澄清。

离心的基本原理离心力利用高速旋转产生的离心力，将不同密度和大小的物质进行分离。沉降速度密度较大的物质受到的离心力较大，沉降速度更快，从而实现分离。沉降系数沉降速度与离心力大小成正比，与物质的密度和摩擦系数有关。

离心的种类及特点11.差速离心根据颗粒沉降速度的不同进行分离，适用于分离不同大小的颗粒。22.密度梯度离心利用不同密度的溶液，将颗粒按密度进行分离，适用于分离密度相近的颗粒。33.超速离心使用高速旋转的离心机，可将更小的颗粒分离，常用于分离细胞器、蛋白质等。

离心分离蛋白质的操作1样品制备首先，将蛋白质样品溶解在适当的缓冲液中，并确保样品均匀分散。2离心条件选择根据蛋白质的大小、密度和所需分离效果，选择合适的离心速度、时间和温度。3离心过程将样品装入离心管，在选定的离心条件下进行离心，使蛋白质沉淀或分离。4沉淀物收集离心结束后，小心地收集蛋白质沉淀物或上清液，并根据需要进行后续处理。

层析法层析法是分离纯化酶的重要方法，广泛应用于生物化学、医药、食品等领域。它利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异来分离混合物。层析法可以根据分离原理、固定相、流动相、操作方式等的不同进行分类，常用的层析方法包括离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等。

层析的基本原理11.混合物分离层析是一种分离混合物的技术，利用不同组分在固定相和流动相中的分配差异来实现分离。22.固定相和流动相固定相是固体或液体，固定在层析柱或平板上；流动相是液体或气体，通过固定相，带动样品组分迁移。33.分配系数不同组分在固定相和流动相中的分配系数不同，导致它们迁移速度不同，从而实现分离。44.洗脱使用流动相将样品组分从层析柱或平板上洗脱下来，收集不同组分的洗脱液，得到纯化的样品。

离子交换层析固定相离子交换树脂包含带电荷的基团。流动相溶液中加入盐以控制离子强度。分离原理利用带电荷的蛋白质与树脂之间的静电相互作用。操作步骤吸附、洗脱、收集。

凝胶过滤层析分离原理根据蛋白质分子大小不同进行分离。分离过程大分子蛋白质先流出，小分子蛋白质后流出。凝胶类型常用的凝胶有葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶。

亲和层析原理利用酶与特定配体之间的高亲和力，将酶吸附在固定化配体上，然后通过洗脱液洗脱，达到分离纯化的目的。优点具有高选择性和高效率，可以有效地分离纯化目标酶，同时可减少操作步骤。应用广泛应用于各种酶的分离纯化，包括工业酶和生物医药酶等，在生物技术和医药领域发挥着重要作用。

结晶法结晶法是一种常用的酶分离纯化方法，利用酶在溶液中达到一定浓度时，会以晶体形式析出的特性进行分离。结晶法可以去除大部分杂质，获得高纯度的酶制剂，并可提高酶的稳定性，延长酶的保存期限。

结晶的基本条件溶解度酶在溶液中的溶解度，决定着结晶发生的可能性。溶解度受温度、pH值、离子强度等因素影响。过饱和度溶液中酶的浓度超过其饱和度，是结晶的前提条件。可以通过降温、加盐、加有机溶剂等方法使溶液过饱和。

结晶分离酶的工艺流程饱和溶液首先将酶溶液浓缩到接近饱和状态，形成过饱和溶液。晶核形成在适当条件下，过饱和溶液中会形成微小的晶核