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ICS67.060
B22
DB34
安徽省地方标准
DB34/T2071—2014
杂交玉米及亲本真实性鉴定DNA分析方法
IdentificationofgenuinenessofhybridcornanditsparentsusingDNAanalysis
method
2014-02-17发布2014-03-17实施
安徽省质量技术监督局发布
DB34/T2071—2014
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由安徽省质量技术监督局提出,安徽省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:安徽省农业科学院水稻研究所。
本标准主要起草人:陆徐忠、杨剑波、倪金龙、刘勋辉、李莉、汪秀峰、马卉、张小娟。
I
DB34/T2071—2014
杂交玉米及亲本真实性鉴定DNA分析方法
1范围
本标准规定了杂交玉米及亲本品种真实性鉴定SSR分子标记法的术语和定义、原理、试剂与溶液、
主要仪器、操作步骤和结果判定。
本标准适用于玉米单交种和自交系的品种真实性鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样
GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验
GB4404.1粮食作物种子第1部分:禾谷类
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
品种真实性varietalgenuineness
供检品种与文件记录(如标签等)是否相符。本标准中指品种间在DNA分子标记带型上的一致性。
3.2
标准样品standardsample
经权威机构认定认证的代表已知品种特征特性的样品,对有性繁殖作物而言,一般为种子。
4原理
根据SSR序列两端保守的单拷贝序列设计特异引物,利用PCR技术扩增每个位点的重复次数,通
过电泳分析其长度多态性,进行杂交玉米及亲本的真实性鉴定。
5试剂与溶液
5.1仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682规定的一级水。
5.2β-巯基乙醇
1
DB34/T2071—2014
5.3异丙醇
5.4剥离硅烷
5.5四甲基乙二胺(TEMED)
5.6TaqDNA聚合酶
5.7PCR反应缓冲液(10×Buffer)
5.825mmol/L氯化镁溶液(MgCl2)
5.9DNA分析仪专用丙烯酰胺胶液
5.10DNA分析仪专用分子量内标
5.11DNA分析仪专用电泳缓冲液
5.121mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液(Tris-Hcl):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷(Tris)
溶解于800mL水中,用盐酸(HCl)调pH至8.0,加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条
件下灭菌20min,4℃储存。
5.1310mol/L氢氧化钠溶液(Na
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