欧美杨组培育苗技术规程.docx

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欧美杨组培育苗技术规程

1范围

本文件规定了欧美杨组培育苗的环境及器具灭菌、培养基制备、外植体选择及处理、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗、室内移栽与管理、大田移栽与管理和病虫害防治等技术要求。

本文件主要适用于欧美杨组培育苗。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T8321.10农药合理使用准则（十）

LY/T1882林木组织培养育苗技术规程

LY/T2280林木种苗生产经营档案

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

欧美杨Populus×euramericana（Dode）Guinier

指欧洲黑杨与美洲黑杨的杂交品种及品种间优良杂种，又称欧美杨无性系。

3.2

外植体explant

用于植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。

4环境及器具灭菌

4.1培养室灭菌

用消毒液（75%酒精等）对地面、组培架等室内设施进行消毒。

4.2超净工作台灭菌

打开工作台通风系统，用75%酒精棉擦拭台面，再用75%酒精喷洒内部空间，关闭玻璃罩，紫外灯照射25min～35min，关闭紫外灯30min后进入工作。

4.3接种室灭菌

接种室内喷洒75%酒精，紫外灯照射25min～35min，关闭紫外灯30min后进入工作。

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4.4器具灭菌

将剪刀、镊子等接种器具清洗干净，用报纸包好，放于耐高温湿热灭菌袋中，121℃高压灭菌30min。使用前在超净工作台内用酒精灯外焰灼烧30s，或用接种器具灭菌器直接灭菌。

5培养基制备

5.1基本培养基

MS培养基，配方见附录A。

5.2培养基配制、灭菌及保存

按LY/T1882有关规定执行。

6外植体选择及处理

6.1外植体选择

欧美杨萌动前，选择无病虫害、生长健壮1年生嫩枝，切枝水培，待芽展叶后，剪取萌发伸展长度在1cm以上的幼叶和叶柄，用流水冲洗1min左右。

6.2外植体处理

在无菌条件下，外植体用75%的酒精浸泡30s，然后用0.1%升汞溶液浸泡5min，再用无菌蒸馏

水冲洗3次，取出后沥干水分备用。

7初代培养

7.1初代培养基

初代培养基配方为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L～0.1mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂6.0g/L，pH6.5。

7.2接种

在超净工作台内，叶片用无菌剪刀剪掉叶子边缘并在叶片中间与叶脉平行处剪开1～3个裂口，用

无菌镊子夹取平铺于初代培养基中，每瓶接种3～4个；叶柄用无菌剪刀剪掉两端，接种方法同叶片。

7.3培养条件

在温度25℃±1℃、光照强度2000Lux、光照12h/d～16h/d的培养室内进行培养。

8继代培养

8.1继代培养基

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继代培养基配方为：MS+6-BA0.3mg/L～0.5mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L+蔗糖25.0g/L+琼脂6.0g/L，pH6.5。

8.2接种

初代培养愈伤组织大于1cm2或不定芽大于5个时进行继代培养。将愈伤组织（含不定芽）剪成2～3块转接于继代培养基中。

8.3培养条件

培养条件同7.3。

9生根培养

9.1生根培养基

生根培养基配方为：1/2MS+IBA0.3mg/L～0.4mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂6.0g/L，pH6.0。

9.2接种

继代培养不定芽长度≥2.0cm时进行生根培养。选取健壮不定芽，用无菌剪刀剪去下端的叶片，并在培养基上方剪下主茎，用无菌镊子夹出插入生根培养基中，插入深度1cm，每瓶接种3个。

9.3培养条件

培养条件同7.3。

10炼苗

选取苗高≥4cm、根长1cm～2cm、不定根5个以上的生根培养瓶，将瓶盖打开，室内放置2d～3d。

11室内移栽与管理

11.1室内移栽

选择根系发达、苗高≥4cm的组培苗，用镊子轻轻从炼苗培养基中拔出，用清水洗去附着在根部的培养基，剪去较长的根系，室内移栽到塑料营养杯中，营养杯规格上口径8cm、底径6cm、杯深12cm。使根系在营养杯中均匀分布，并与基质紧密接触，基质装到营养杯口下1cm处。基质为腐殖土、大田土、河沙按2﹕1﹕1比例混合均匀，经121℃高压灭菌30min。

11.2管理

移栽完立即浇透水，并搭建塑料拱棚保持拱棚内温度