β-葡萄糖苷酶高产菌及其在转化制备白藜芦醇中的应用.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN103865804A

(43)申请公布日2014.06.18

(21)申请号CN201410037538.X

(22)申请日2014.01.26

(71)申请人玉林师范学院

地址537000广西壮族自治区玉林市教育中路299号

(72)发明人苏龙覃荣燕区善芬许译中

(74)专利代理机构广西南宁公平专利事务所有限责任公司

代理人杨立华

(51)Int.CI

C12N1/14

C12P7/22

C12R1/69

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

β-葡萄糖苷酶高产菌及其在转化制

备白藜芦醇中的应用

(57)摘要

本发明公开了一种β-葡萄糖苷酶高

产菌，系以虎杖为碳源从自然界中筛选

的，其保藏编号为CCTCC

NO.M2013633，分类命名为米曲霉

（Aspergillusoryzae）HHL，该菌能高效转

化白藜芦醇苷为白藜芦醇。据此，发明人

建立了一种利用上述β-葡萄糖苷酶高产菌

转化制备白藜芦醇的方法，一方面可在温

和条件下水解白藜芦醇苷，避免了传统方

法导致有效成分损失的缺陷，有效地提高

了产量；另一方面利用现代微生物发酵工

程技术和酶工程技术使虎杖的有效成分白

藜芦醇苷在体外可控条件下实现规模转

化，降低了生产成本，提高了生产效率。

本发明为大量工业化生产β-葡萄糖苷酶、

白藜芦醇提供了一条可行途径，具有较大

的经济效益和社会效益，市场开发前景广

阔。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种β-葡萄糖苷酶高产菌，其特征在于保藏编号为CCTCCNO.M2013633，分类

命名为米曲霉HHL。

2.权利要求1所述β-葡萄糖苷酶高产菌在转化制备白藜芦醇中的应用。

3.利用权利要求1所述β-葡萄糖苷酶高产菌转化制备白藜芦醇的方法，其特征在于

包括以下步骤：

（1）种子制备：将保存的米曲霉HHL孢子接种于斜面培养基上，置于35℃恒温

培养箱培养2天，获得孢子，用无菌水洗脱孢子获得孢子悬浮液，将孢子悬浮液接

入摇瓶发酵培养基；所述斜面培养基为查氏培养基；所述摇瓶发酵培养基是产酶优

化培养基；

（2）转化制备白藜芦醇：在温度为35℃、pH7.0、装液量为100ml/250ml、接种量

为1%、转速180r/min的条件下发酵120h，加入10%虎杖液，在温度为50℃、

pH5.0的条件下反应5h。

4.根据权利要求3所述利用β-葡萄糖苷酶高产菌转化制备白藜芦醇的方法，其特征

在于：所述孢子悬浮液浓度为1.0×10Sup8/Sup个/ml。

5.根据权利要求3所述利用β-葡萄糖苷酶高产菌转化制备白藜芦醇的方法，其特征

在于：所述虎杖液按以下操作制备：取10g虎杖按质量体积比1:10用蒸馏水浸泡

20分钟，然后煮沸30分钟，冷却后用8层纱布过滤，依法重复煮三次；合并滤液，

最后用蒸馏水定容至100ml，得虎杖煮提液。

6.根据权利要求3所述利用β-葡萄糖苷酶高产菌转化制备白藜芦醇的方法，其特征

在于：所述产酶优化培养基配方为麸皮汁10%、酵母膏0.5%、硫酸镁0.1%、磷酸

氢二钾0.1%、抗坏血酸0.1%。

说明书

技术领域

本发明属于微生物生物转化技术领域，尤其涉及一种β-葡萄糖苷酶高产菌及其在

转化制备白藜芦醇中的应用。

背景技术

白藜芦醇是中草药虎杖中的一种天然活性物质，化学名称为芪三酚(即3，5，4’－

三羟基－l，2一二苯基乙烯)，是一种活性多酚物质，分子式为

CSub14/SubHSub