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实验步骤
1.各组细胞分别处理后，弃培养基，PBS洗涤三次（打到壁上）。
2.多聚甲醛固定20min，4°C(4%多聚甲醛)。
3.弃多聚甲醛，PBS洗涤三次，0.2%-5%(5%浓度太大，不易溶解，2%)Triton-x（覆盖爬
片即可），破膜15min
4.弃5%Triton-x，PBS洗涤三次，5%BSA工作液，室温封闭2h。
5.Gamma-H2AX抗体（1：200）（10μl）孵育细胞，4°C过夜。在缠了封口膜的载玻片上孵
育，载玻片-封口膜-抗体-细胞-爬片（有细胞那面的朝下），孵一抗二抗都要将载玻片置
于孵育盒内，盒底铺纱布，PBS湿润。
6.PBS振荡洗涤3次，每次5min，FITC标记羊抗鼠二抗（1：1000）。室温孵育细胞2h（在
暗室操作）。
7.PBS振荡洗涤3次，每次5min，DAPI室温染色10min，PBS洗涤3次。
8.滴加抗荧光猝灭剂封片剂，指甲油封片，Niko共聚焦显微镜下观察（避光）。
溶液配制：现配现用（需准备大量PBS）
4%多聚甲醛
5%BSA工作液，取1g或2gBSA，于PBS20ml或40ml
5%Triton-x100：取1mlTriton-x100，加PBS至20ml，4°c保存备用。
2%Triton-x100:1mlTriton-x100溶于50mlPBS
细胞传至3代准备处理时直接将细胞接种至放有爬片的24孔板，接种密度，2皿-2ml-1/20
爬片在孔板底部不易取出，需用针头挑出
为使针头挑爬片更容易，可将爬片置于直径较大的六孔板中
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