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静注加替沙星在家兔体内的药代动力学研究

静注加替沙星在家兔体内的药代动力学研究

一．实验目的：

1.了解加替沙星的药理学作用和临床血药浓度监测方法；

2.熟悉家兔静脉注射药物和股动脉采血的操作；

3.建立测定家兔血清中加替沙星药物浓度的高效液相方法；

4.掌握分析数据的方法以得到相关药代动力学参数。

二．背景：

喹诺酮类药物是一种DNA旋转酶抑制剂,它作用于细菌DNA旋转酶,干扰DNA超螺旋结构的解旋,从而阻碍DNA的复制,而呈现杀菌作用。该类药物的共同特点是:抗菌作用强大,抗菌谱较广,主要对抗革兰阴性菌,对革兰阳性菌也有相当作用。

加替沙星（Gatifloxacin）为第三代喹诺酮类药物，为8-甲氧氟喹诺酮类外消旋化合物，体外具有应谱的抗革兰氏阴性和阳性微生物的活性，其R-和S-对映体抗菌活性相同。

据文献报告，加替沙星口服吸收良好，且不受饮食因素影响，其绝对生物利用度为96%，药物浓度在服用1-2小时后达峰。他体内的分布较广,可进入大多数药物不能进入的骨、关节和前列腺组织等。加替沙星的临床有效性评价在国外报道较多,而国内关于加替沙星临床试验的报道较少。

在本实验中，对健康家兔耳缘静脉注射加替沙星之后，药物会在体内血液中进行二房室模型分布，分别在不同时刻进行血液采集，用高效液相色谱法对各时刻血浆内药物浓度进行检测，可以绘制加替沙星注射液在家兔体内药代动力学曲线，并可以据此进行相关药代动力学参数的计算。

三．实验试剂与仪器：

3.1动物：健康家兔1只（雌雄均可）

3.2试剂：

加替沙星氯化钠注射液，1mg/ml加替沙星溶液，20%乌拉坦，肝素生理盐水，10%高氯酸，90%甲醇，醋酸铵15mM/L，醋酸，乙腈，蒸馏水

3.3仪器：

恒温兔台，手术仪器一套，头皮针，注射器，抗凝管，动脉夹，插管，棉线

SHIMADZUHPLC色谱仪:SHIMADZUCTO-10AS柱温箱，LC-20AT液相色谱仪，SPD-20A紫外检测器，自动进样器，数据处理工作站，高速离心机，涡旋震荡仪

四．实验条件及试剂选择：

4.1取血点的选择

对于一个较完整的体内药代动力学曲线，采血时间点应至少在吸收相取2个，平衡相去2个，消除相取5个，保证取血持续时间为3-5个半衰期，最后一个取血点处药物浓度至少低于110Cmax。对于加替沙星消除半衰期t1/2=1.4292(h),因此本实验中取血点定在2,5,10,15,30,45,60,90,120min。

4.2取血方式及血量

鉴于如果采用颈动脉会影响家兔呼吸，而且给药时家兔双耳分别用于麻醉和加替沙星的给药，但动脉血量更丰富，因此本次实验采用耳缘给药，股动脉插管取血。由于家兔血量有限，其中血浆量占全血量40-50%，血清量仅占全血量10%左右，因此在不影响家兔生存，且可以得到足够分析需要样本量的条件下，本次实验采用家兔全血提取的血浆进行检测，每次取血0.5ml。

4.3样品处理

标准曲线的绘制和采集的9个血样浓度的测定应平行操作。由于实验时间的关系，我们分两次操作。但处理方法需保持平行：100μl血浆（标准液10μl和空白血浆90μl）+100μl10%高氯酸涡旋振荡3min,12000rmp离心10min进而取上清进样。这样标准曲线绘制的时候的浓度为在加入空白血浆后的这100μl体系的浓度。

4.4色谱条件

色谱柱：C184.6×150mm

流动相：水相：醋酸铵15mM/L，用醋酸调至PH3.0

有机相：乙腈

水相：有机相=78:22

流速：1ml/min

检测波长294nm

柱温：40℃

检测顺序：由低浓度到高浓度

五．实验步骤：

5.1给药及取血

取家兔一只，称重，将家兔以乌拉坦5ml/kg麻醉，背位固定于手术台上。在一侧腹股沟部搏动处剪毛，用1ml1%盐酸普鲁卡因作皮下局麻。纵切皮肤3~4cm，分离股动脉，在动脉下穿双线，结扎近心端，作静脉切口，插入与注射器相连的静脉插管（内充满肝素化盐水），结扎固定，检查取血是否顺利。耳缘静脉给药加替沙星1ml/kg，药物全部推入之后立即开始计时，于2,5,10,15,30,45,60,90,120min处取血各0.5ml，加入抗凝剂涡旋混匀，高速离心(4000r/min)15min。取上层清夜，静置冷藏保存。

5.2标准曲线的绘制

5.2.1标准待测溶液配制

由1mg/ml的加替沙星母液稀释配制500μg/ml,250μg/ml,125μg/ml,62.6μg/ml,31.2μg/ml,15.6μg/ml,7.8μg/ml,3.9μg/ml系列浓度的加替沙星标准溶液。各浓度标准溶液取10μl分别加入90μl空白血浆中，混匀，分别加入10