MHV—3诱导小鼠暴发性肝炎模型中γδT细胞的活化性受体表达.pdfVIP

MHV—3诱导小鼠暴发性肝炎模型中γδT细胞的活化性受体表达

目的探討暴发性肝炎初期疾病急速恶化的机制，探讨在3型鼠肝炎病毒

（MHV-3）诱导的小鼠爆发性肝炎模型中，小鼠感染病毒前后γδT细胞其活化受

体NKG2D表达情况。方法建立MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型，在不同感

染时间点0、24、48h时对小鼠肝组织行苏木精-伊红染色（HE染色），观察肝

脏病理学改变，并检测血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平。采

用流式细胞学方法标记γδT细胞，并标记其NKG2D的表达。结果MHV-3诱

导小鼠暴发性肝炎模型中，γδT表面所表达活化性受体NKG2D表达增高。结

论小鼠暴发性肝炎初期，肝脏重要的天然免疫效应细胞γδT细胞表面活化性受

体NKG2D表达增高。

标签：暴发性肝炎；3型鼠肝炎病毒；γδT细胞；NKG2D

慢性乙型肝炎作为我国一种常见的慢性传染病，严重地危害着国民的生命健

康。由其发展的急性肝损伤或者肝功能衰竭死亡率极高。有研究证实3型鼠肝炎

病毒（murinehepatitisvirusstrain3，MHV-3）诱导的小鼠暴发性肝炎，其病程转

归及疾病预后和急性肝衰竭相似，因此该模型是研究重症肝炎尤其是病毒性肝炎

重症化良好的动物模型之一。肝脏是机体非常重要的免疫器官，其中含有大量参

与天然免疫过程的免疫细胞。T细胞免疫应答可广泛参与天然免疫以及特异性免

疫[1-2]。根据T细胞抗原受体（TCR）两条肽链构成的不同（αβ和γδ链），可

将T细胞分为αβ细胞和TγδT细胞，αβ细胞在T特异性免疫应答中发挥重要作

用；而γδT细胞由于其以非主要组织相容性复合体（MHC）限制性参与免疫应

答以及在特定器官分布的特点，在天然免疫中发挥着独特的作用[3]。γδT细胞的

功能调控（人和小鼠γδT细胞表达CD94/NKG2A以及CD94/NKG2D），在天然

免疫阶段具有相当的意义[4-5]。NKG2D作为γδT细胞的激活性受体，其表达的

改变，对疾病的进展有一定的意义[6]。本试验利用MHV-3感染BALB/cJ小鼠，

建立小鼠暴发性肝炎模型，通过监测小鼠肝脏中γδT细胞表面活化受体NKG2D

分子表达，探求暴发性肝炎可能存在的干预途径。

1材料与方法

1.1主要试剂及仪器

MHV-3原种来自美国育种保育中心（Rockville，MD，USA），在华中科技

大学同济医学院附属同济医院感染性疾病研究所实验室（以下简称“我实验室”）

以L2型单种细胞进行扩增，冻存保种。流式细胞仪分析不同荧光标记的抗小鼠

单克隆抗体。APC-antiCD3e，Percp-A-antiγδTCR，PE-antiNKG2D，PE-antiIGg

（NKG2Diso同型），抗体均购自eBioscience公司。PBS为实验室自行配置，

高压灭菌后备用。Percoll购于Pharmacia公司。分析式流式细胞仪为BD公司的

产品。

1.2实验动物

BLAB/cj小鼠（雌性，6～8周龄）购于北京利华（实验动物）有限公司。

饲养于我实验室，SPF级，温度25°C，湿度70%。

1.3方法

1.3.1暴发性肝炎小鼠动物模型MHV-3以无菌PBS重悬配置，制备感染液。

无菌医用注射器抽取感染液，注入小鼠腹腔（100PFU感染每只小鼠）即为感染

组。对照组以无菌PBS溶液以同等剂量注入小鼠腹腔。每组小鼠3～5只，实验

重复3次。

1.3.2小鼠肝脏非实质细胞获得方法脊椎脱臼处死不同组别小鼠。外科方

法：取出小鼠肝脏，将小鼠肝脏置于不锈钢滤网（200目）上，眼科剪剪碎，用

2mL注射器吸取磷酸盐缓冲液（PBS）反复冲洗，使得细胞经滤网进入烧杯中

的PBS中，得到肝脏细胞悬液；500r/min，离心机离心5min，留取悬浮液，去

沉淀；再次1500r/min，离心机离心10min，留取沉淀。取沉淀与5mL40