乙型肝炎表面抗原(HBsAg)实验操作规程(吉比爱).pdfVIP

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）实验文件编码：PAFC-BXJY-SOP-LM04-01

操作规程版本：1.3页码/总页：1/5

编写/日期：审核/日期：批准/日期：生效日期：

1.目的和适用范围：

1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。

适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。。

1.2.

2.术语：无。

3.职责：

3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。

3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。

4.工作程序

4.1.操作说明

4.1.1.实验原理：应用双抗体夹心酶联免疫法原理检测人血清或血浆中的HBsAg。用特异性抗

-HBs抗体包被酶标板，待检血清或血浆中的HBsAg可与包被抗体反应，再与酶标抗—HBs抗

体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据吸

光值（A值）判定有无HBsAg的存在。

4.1.2.实验所需设备和材料：酶标分析仪、洗板机、50ul加样器、100ul加样器、37℃恒温

孵育箱，一次性加样吸头、试剂槽、过程记录单等。

4.1.3.实验室环境条件：实验检测的室温应保持在18℃-25℃之间。

4.1.4.实验流程：标本接收核对→编制加样顺序的布局图→设置条孔→加样→加酶标记物

→温育→洗板→加显色剂→温育→加终止液→酶标仪读数→结果判断→结果报告

4.2.实验操作步骤：

4.2.1.准备：自2-8℃试剂冰箱中取出试剂盒，在室温中平衡30分钟；包被板平衡至室温后

才可打开外包装，以防止板条吸收空气中的水蒸气；将20倍浓缩洗涤液用纯化水20倍稀释

后备用。剩下的试剂及时封存于2℃-8℃冰箱中，以备后用。

4.2.2.设定：将待测样品按需排列设定加样顺序。每板实验设空白对照1孔（若用双波长检

测，可不设空白对照孔），阴性对照3孔，阳性对照2孔。

4.2.3.加样：将所需数量的板条固定于板架。除空白对照孔外，在相应孔中加入阴性阳性对

照和待检样品各100ul.

4.2.4.温育第一次：贴上封口胶，置37℃温育60分钟。

4.2.5.加酶：小心撕去封口胶，除空白孔外，每孔加入酶工作液100ul.

4.2.6.温育第二次：贴上封口胶，置37℃温育30分钟

洗涤：小心撕去封口胶。

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）实验文件编码：PAFC-BXJY-SOP-LM04-01

操作规程版本：1.3页码/总页：2/5

手工洗操作：弃去各孔中液体、拍干。每孔注满洗液，静置5-10秒后弃尽，洗涤5次，拍干；

洗板机操作：每孔加入350ul洗液，每次洗涤间隔5-10秒，洗涤5次拍干。

显色：每孔加入底物液A50ul，再加入底物液B50ul,轻拍混匀，置37℃避光显色30分钟。

测定：显色完毕后，每孔加入终止液50ul，轻拍混匀，立即在单波长450nm(须以空白对照孔

调零)或双波长（主波长450nm,参考波长600~650nm）下测定各孔A值。

4.3.结果判读：

4.3.1.实验有效性判断：阳性对照A值均值应≥1.00，阴性对照A值均值应≤0.10，则本次

试验有效；否则，视为无效结果，应重复试验。

4.3.2.临界值（Cutoff）计算：

临界值=0.055+阴性对照A值均值。

若阴性对照A值均值小于0.05时，按照0.05计算，否则按照实际值计算。

结果判定：

阴性判定：样品A值＜临界值（Cotoff）为阴性；

阳性判定：样品A值≥临界值（Cotoff）为阳性

。

4.3.3.检验结果的解释

大多数正常人群该项指标检测为阴性反应，如复试结果阳性则可能是HBsAg阳性；

一些HBV感染患者HBsAg检测为阴性，可能是早期感染所致；

洗板不充分是导致假阳性的主要原因；

另外一些操作错误可能导致试验结果的假阳性和假阴性，比如：试剂盒在有效期外使用、加

样器不准确、室内温度过