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生物制药技术期末复习

第一章绪论

1、生物技术的四个方面相互联系：

基因工程是生物技术的核心和关键，是主导技术；细胞工程是生物技术的基础；酶工程是生物技术的条件；发酵工程是生物技术获得最终产品的手段。

2、生物技术药物：采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物，称为生物技术药物。

3、生物药物的四大类型：一是应用重组DNA技术（包括基因工程技术、蛋白质工程技术）制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂；二是基因药物，如基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等；三是来自动物、植物和微生物的天然生物药物；四是合成与部分合成的生物药物。

4、生物药物按其功能用途分为三类：一是治疗药物，治疗疾病是生物药物的主要功能。二是预防药物，对于许多传染性疾病来说预防比治疗更重要。预防是控制传染病传播的有效手段，常见的预防药物有各种疫苗、类毒素等。三是诊断药物，用于诊断的生物药物具有速度快、灵敏度高、特异性强的特点。

FDA：食品与药品监督管理局GMP：药品生产管理规范

基因工程肽类药物

名称

作用

各种干扰素（IFN）

抗病毒、抗肿瘤、免疫调节

各种细胞介素（IL）

免疫调节、促进造血

各种集落刺激因子（CSF）

刺激造血

红细胞生成素（EPO）

促进红细胞生成，治疗贫血

肿瘤坏死因子（TNF）

杀伤肿瘤细胞、免疫调节、参与炎症和全身性反应

表皮生长因子（EGF）

促进细胞分裂、创伤愈合、胃肠道溃疡防治

神经生长因子（NGF）

促进神经纤维再生

骨形态发生蛋白（BMP）

骨缺损修复、促进骨折愈合

组织纤溶酶激活剂（t-PA）

溶解血栓、治疗血栓疾病

血凝因子Ⅷ、Ⅸ

治疗血友病

生长激素（GH）

治疗侏儒症

胰岛素

治疗糖尿病

超氧化物歧化酶（SOD）

清除自由基、抗组织损伤、抗衰老

5、细胞因子：是一个调节蛋白或糖蛋白构成的多样性群组，这些分子通常是由机体微量产生，它们在不同的细胞间充当化学通信分子，通过与特异性细胞表面受体结合诱导细胞效应，从而激活各种细胞内信号转导事件。（是指主要由免疫细胞分泌的、能调节细胞功能的小分子多肽。）

第二章基因工程制药

1、1982年第一个基因重组产品——胰岛素。

2、医用活性蛋白和多肽类，包括：①免疫性蛋白，eg：各种抗原和单克隆抗体。②细胞因子，eg：各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子及凝血因子。③激素，eg：胰岛素、生长激素、心钠素。④酶类，eg：尿激酶、链激酶、葡激酶、组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化物歧化酶等。

3、问题：来源于真核细胞的产生基因工程药物的目的基因，为什么不能进行直接分离？

析：1）真核细胞中单拷贝基因仅是染色体DNA中很小一部分(10-5~10-7)，即使多拷贝基因也是极少的，因此从染色体中分离纯化目的基因是极为困难的。

2）原核表达系统是有局限性的，主要是由于真核基因的内含子及基因的后翻译过程。

3）真核基因内一般都有内含子，如果以原核细胞作为表达系统，即便分离出真核基因，由于原核细胞缺乏mRNA的转录后加工过程，真核基因转录的mRNA也不能加工，拼接成成熟的mRNA,因此，不能直接克隆真核基因。

4、制备基因工程药物的基本过程

上游：主要指的是目的基因分离、工程菌（或细胞）构建。上游阶段的工作主要在实验室内完成。

下游：主要指的是从工程菌（或细胞）的大规模培养一直到产品的分离纯化、质量控制等。

5、cDNA克隆的载体有两类：质粒DNA（eg：pUC、pBR322等）和噬菌体DNA（eg：λgt10、λgt11等）。

6、cDNA文库的鉴定：根据重组体的表型进行筛选，主要有抗性基因失活法和菌落或噬菌斑颜色改变法。然后采用凝胶电泳、分子杂交、DNA序列分析测定等方法进行进一步筛选和鉴定。

7、化学合成法：1）方法：先合成目的基因DNA不同部位的两条链的寡核苷酸片度，再退火成为两端形成黏性末端的DNA双链片段，最后把这些DNA片段按正确的次序进行退火连接形成较长的DNA片段，再用连接酶连接成完整的基因。

2）人工化学合成的限制：一是不能合成太长的基因，50~60bp；二是人工合成时，遗传密码的简并性可导致中性突变；三是费用较高。

8、基因表达：是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。

基因表达有两类宿主细胞：一类是原核细胞（胞内表达），目前常用的有大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌等；另一类是真核细胞（胞外表达），常用的有酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞等。

9、真核基因在大肠杆菌中的表达形式：

（1）融合蛋白的形式

真核基因在大肠杆菌中表达的一种简便方式便是使其表达为一种融合蛋白的一部分。

融合蛋白：短的原核多肽与真核蛋白结合；氨基端为原核序列，羧基端为真核系列；融合蛋白