北师版高中生物学选择性必修3生物学技术与工程精品课件 第3章 基因工程 第三节 第2课时 胚胎工程的技术手段.pptVIP

2.当受体细胞是真核生物细胞时,目的基因的表达及产物的检测鉴定,主要从哪些方面进行?提示:(1)检测目的基因是否整合到了受体细胞的基因组上,经常采用的方法是PCR检测或分子杂交检测。(2)检测目的基因是否转录出mRNA,通常进行PCR或RNA的分子杂交检测。(3)检测目的基因最终能否翻译出有功能的蛋白质,可利用目的蛋白的抗体进行检测。(4)检测目的基因是否表达还可根据目标性状的有无来判断。【归纳提升】目的基因的表达及产物检测鉴定(1)当受体细胞是真核生物细胞时,首先检测目的基因是否整合到了受体细胞的基因组上,借助PCR检测或分子杂交检测;第二步检测目的基因是否转录出mRNA,通常提取受体细胞的总RNA,将其中的mRNA反转录成cDNA,进行PCR,或者直接进行RNA的分子杂交检测;第三步检测目的基因是否翻译出有功能的蛋白质,从受体细胞中提取蛋白质后,进行电泳分离,然后利用目的蛋白的抗体进行检测;第四步如果目的基因的表达产物具有明显的表型性状,那么,还要根据目标性状的有无来判断目的基因是否表达。(2)当受体细胞为原核细胞时,表达载体导入受体细胞后,表达载体独立于DNA分子之外,检测时只需提取质粒直接进行限制性内切核酸酶酶切,测序即可。检测目的基因是否转录、翻译出目的蛋白时,只需从受体细胞或培养液中,提取蛋白质,进行电泳分离,然后再利用相应抗体进行检测。【典型例题】