人教版高中生物学选择性必修3生物技术与工程精品课件 第3章 基因工程 第1节 重组DNA技术的基本工具 (2).pptVIP

本课结束2.DNA连接酶(1)种类(2)作用:将双链DNA片段连接起来,恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。(3)结果:将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子。种类来源特点E.coliDNA连接酶大肠杆菌E.coliDNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于T4DNA连接酶T4DNA连接酶T4噬菌体3.基因进入受体细胞的载体(1)质粒①本质:一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外,并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。②作为载体的条件:a.有一个至多个限制酶切割位点,供外源DNA片段(基因)插入其中;b.进入受体细胞后,能在细胞中进行自我复制,或整合到受体DNA上,随受体DNA同步复制;c.常有特殊的标记基因,便于重组DNA分子的筛选。(2)其他载体:噬菌体、动植物病毒等。三、DNA的粗提取与鉴定1.实验原理(1)DNA不溶于酒精,但某些蛋白质溶于酒精。(2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,它能溶于2mol/L的NaCl溶液。?(3)在一定温度下,DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。2.材料用具:(略)3.方法步骤(1)提取:称取约30g洋葱,切碎,研磨→过滤(除杂质,取上清液)→析出DNA(在上清液中加入预冷的酒精溶液,静置2~3min,溶液中出现的白色丝状物,即粗提取的DNA。用玻璃棒卷起白色丝状物,吸去水分;或离心,取沉淀物,晾干)。(2)鉴定合作探究释疑解惑[问题引领]知识点一限制性内切核酸酶1.限制酶的识别序列有什么特点?提示:大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成。限制酶所识别的序列为回文序列(两条链从5到3方向的序列一致),都有一条中轴线。2.限制酶虽然主要存在于原核生物中,但对原核生物自身DNA不会起到切割作用,这是为什么?提示:原核生物自身DNA上不存在限制酶的识别序列和切割位点。3.结合教科书第71页图3-3,分析黏性末端和平末端是如何形成的。提示:限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开,就形成黏性末端。在识别序列的中心轴线处切开,就产生平末端。4.某同学认为同一限制酶切割产生相同的黏性末端,因此基因工程必须使用同一种限制酶处理后的黏性末端才行,这个同学的说法正确吗?说明你的理由。提示:不正确。不同的限制酶也可能产生相同的黏性末端,因此基因工程中也可使用不同的限制酶处理获得相同的黏性末端。[归纳提升]1.限制酶(1)限制酶的作用限制酶具有特殊的识别和切割功能,在基因工程中,一方面用于切割含目的基因的DNA分子,以获取目的基因;另一方面用于切割载体。(2)识别序列的特点2.比较DNA酶、解旋酶、限制酶酶作用产物DNA酶断开相邻脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,水解DNA形成四种脱氧核苷酸解旋酶解旋,断开双链互补碱基之间的氢键DNA单链限制酶识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开含有黏性末端或平末端的双链DNA片段3.限制酶是一类酶,不是一种酶,不同种类的限制酶识别序列和切割位点不同,具有专一性,但不同限制酶切割后可能形成相同的末端。[典型例题]下表所示为4种限制酶的识别序列及其切割位点,请回答下列问题。(1)从表中4种酶的切割位点看,可以切出平末端的酶是。?(2)限制酶切割的DNA片段的缝合依靠的是酶,它的作用是形成磷酸二酯键;两条链间的碱基对通过连接起来。?(3)图1中的质粒分子可被表中限制酶切割。?(4)在相关酶的作用下,图1中的甲与图2中的乙(填“能”或“不能”)拼接起来。请说明理由:。?答案:(1)SmaⅠ(2)DNA连接氢键(3)EcoRⅠ(4)能二者具有相同的黏性末端解析:(1)由题表中4种限制酶的切割位点可知,SmaⅠ可切出平末端。(2)限制酶切割的DNA片段缝合时用DNA连接酶进行连接,形成磷酸二酯键;两条链之间的碱基依据碱基互补配对原则形成氢键。(3)由质粒的碱基序列可知,质粒分子可被限制酶EcoRⅠ切割,切割后形成链状DNA。(4)由题图可知,甲和乙的黏性末端相同,在DNA连接酶的作用下可以拼接起来。[问题引领]知识点二DNA连接酶1.DNA连接酶通过形成什么化学键把两个DNA片段连接起来?提示:通过形成磷酸二酯键将两个DNA片段连接起来。2.常用的两类DNA连接酶的作用有什么区别?提示:E.coliDNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于T4DNA连接酶。3.DNA连接酶的识别有无特异性?能否催化连接不同限制酶切割形