细胞工程动物细胞工程.ppt

思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。第32页,共56页，星期六，2024年，5月3、动物细胞融合技术的应用细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。第33页,共56页，星期六，2024年，5月植物体细胞杂交动物细胞融合理论基础融合前处理诱导方法结果应用相同点制备单克隆抗体培育新品种杂交细胞杂交植株突破了远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离电激、振动、离心、聚乙二醇纤维素酶、果胶酶胰蛋白酶(或胶原蛋白酶）细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞的全能性电激、灭活的病毒、聚乙二醇融合的原理相同，诱导方法相似植物细胞杂交与动物细胞融合的比较第34页,共56页，星期六，2024年，5月人们获得抗体的传统方法是?将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体这种方法的缺点是什么?效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？B淋巴细胞在体外不能无限增殖。二：动物细胞融合的成功应用

——单克隆抗体的制备思考第35页,共56页，星期六，2024年，5月抗原吞噬细胞摄取处理T细胞暴露、呈递B细胞直接刺激浆细胞增殖、分化抗体产生从动物血清中分离淋巴因子获取抗体的传统方法该方法的缺点是？第36页,共56页，星期六，2024年，5月传统获得抗体方法的缺点：产量低，纯度低，特异性差如何获得大量的、特异性强的抗体？利用动物细胞培养技术克隆单一的经免疫的B细胞这就是“单克隆抗体”第37页,共56页，星期六，2024年，5月单克隆抗体的制备—极富创造性的方案将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。第38页,共56页，星期六，2024年，5月1.如何取得B淋巴细胞？2.把B淋巴细胞与骨髓瘤细胞放在一起，有几种融合方式？3.如何筛选出所需的细胞?4.细胞培养有几种方式?5.如何提取单克隆抗体？制备过程提示:第39页,共56页，星期六，2024年，5月制备单克隆抗体2.单克隆抗体制备的原理◆每一个只分泌一种特异性抗体。◆具有无限增殖的特性。◆技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能，又能产生足够数量的。◆利用技术大量培养杂交瘤细胞。B淋巴细胞骨髓瘤细胞动物细胞融合动物细胞培养大量增殖特定抗体第40页,共56页，星期六，2024年，5月单克隆抗体制备过程注射特定抗原骨髓瘤细胞在具有筛选作用的培养基上培养体外培养注射到小鼠腹腔免疫的B淋巴细胞（浆细胞）细胞培养诱导融合杂交瘤细胞专一抗体检验专一抗体检验阳性细胞克隆细胞单克隆抗体第一次筛选第二次筛选第41页,共56页，星期六，2024年，5月BMMBMBMBBMM筛选1融合体外培养体内培养注射入小鼠体内培养抗原培养瓶中筛选2小鼠动物细胞培养骨髓瘤细胞单克隆抗体抗原免疫处理动物细胞融合筛选动物细胞培养提取第42页,共56页，星期六，2024年，5月例：已知细胞增殖时合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将两种细胞在培养液中混合，加聚乙二醇促融，在培养液中有种细胞。加入氨基喋呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的及其彼此融合的细胞不能增殖。人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交细胞中可利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。从培养液中分离出杂交细胞。如何筛选出培养液中的杂交瘤细胞？5骨髓瘤细胞第43页,共56页，星期六，2024年，5月多孔细胞培养板有限稀释法将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养