人教版高中生物学选择性必修3生物技术与工程精品课件 第3章 基因工程 第2节 第1课时 筛选和获取目的基因与构建基因表达载体.pptVIP

比较项目细胞内DNA复制PCR技术联系(1)模板:均需要脱氧核苷酸单链作为模板(2)原料:均为4种脱氧核苷酸(3)酶:均需DNA聚合酶(4)引物:都需要引物,使DNA聚合酶从引物开始进行互补链的合成引物的作用视角应用视角1PCR的过程1.下列关于PCR技术的叙述,错误的是()A.PCR技术的原理是DNA的复制B.该反应体系缓冲液中一般要添加Mg2+,以激活DNA聚合酶C.引物应选用图中的A、DD.引物是一小段DNA或RNA,用于PCR的引物长度通常为30~40个核苷酸D解析PCR技术的原理是DNA的复制,A项正确;真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+的激活,因此缓冲液中一般要添加Mg2+,B项正确;引物应选用图中的A、D,才能将目的基因片段扩增出来,C项正确;引物是一小段DNA或RNA,用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸,D项错误。2.[2023辽宁沈阳市级高中联合体高二期中]用PCR技术将DNA分子中的A1片段进行扩增,设计了引物Ⅰ、Ⅱ,其连接部位如下图所示,X为某限制酶识别序列。扩增后得到的绝大部分DNA片段是图中的()D解析利用PCR技术将DNA分子中的A1片段扩增时,以引物Ⅱ所在的单链为模板在引物Ⅰ的作用下合成DNA时,引物Ⅱ上的X片段也被作为模板合成子链,因此扩增后得到的绝大部分DNA片段如图D所示。视角2PCR与DNA复制的比较3.下列有关体内DNA复制与PCR技术比较的叙述,错误的是()A.二者子链的延伸方向相同,均为5端→3端B.二者均需要解旋酶破坏氢键来实现解旋C.体内DNA复制需要能量,PCR反应也需要能量D.二者遵循的碱基互补配对原则相同B解析DNA体内复制与利用PCR技术扩增DNA时,子链的延伸方向相同,均为5端→3端,A项正确;PCR扩增中双链DNA解旋不需要解旋酶,而是在高温条件下使氢键断裂,B项错误;体内DNA复制与利用PCR扩增DNA时都需要能量,但两者所需能量来源不同,C项正确;体内DNA复制与利用PCR扩增DNA时,遵循的碱基互补配对原则相同,D项正确。主题二基因表达载体的构建情境探究构建基因表达载体是基因工程的核心步骤。目的是让基因在受体细胞中稳定存在,并且遗传给下一代;同时,使目的基因能够表达和发挥作用。请讨论回答下列问题。1.据图分析,构建基因表达载体时,能否用限制酶SmaⅠ切割质粒?为什么?2.与只使用EcoRⅠ相比较,使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点是什么?提示不能。因为SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因。质粒上的抗性基因是标记基因,便于重组DNA分子的筛选,若被破坏,无法进一步筛选。提示可以防止质粒和目的基因的自身环化以及目的基因与载体的反向连接。3.质粒作为基因工程的载体,包含标记基因、启动子、终止子等多种功能元件,这些功能元件是质粒中自带的吗?提示不一定,有些是根据需要人为添加的。例如想让目的基因在某种特定细胞中表达,就需要在质粒中添加上在这种细胞中特异性表达的启动子,从而保证目的基因的表达。方法突破启动子和终止子、起始密码子和终止密码子的区别项目启动子终止子起始密码子终止密码子成分DNA片段DNA片段mRNA上三个相邻碱基mRNA上三个相邻碱基位置基因上游基因下游mRNA首端mRNA尾端作用RNA聚合酶识别和结合的部位,驱动基因转录出mRNA决定转录的结束翻译的起始信号决定翻译过程的结束【知识拓展】真、原核生物的基因结构视角应用视角1载体的组成元件和构建过程1.下面是利用基因工程技术培育转基因植物,进而生产可食用疫苗的部分过程示意图,其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性内切核酸酶。下列说法错误的是()A.图示过程是基因工程的核心步骤B.表达载体构建时需要用到限制酶SmaⅠC.抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来D.除图示组成外,表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构B解析图示过程为基因表达载体的构建过程,是基因工程中的核心步骤,A项正确;构建表达载体过程中需要将目的基因完整切割下来,此时要用到限制酶PstⅠ、EcoRⅠ,若使用SmaⅠ将破坏抗原基因,B项错误;抗卡那霉素基因是标记基因,目的是便于鉴定和筛选含有目的基因的细胞,C项正确;基因表达载体应包括启动子、目的基因、终止子和标记基因等结构,D项正确。2.肿瘤坏死因子(TNF)在体内和体外均能杀死某些肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞的增殖,科研人员欲利用乳腺生物反应器大量生产TNF,用于临床上疾病的治疗。已知HindⅢ、BamH