植物组织培养 小抄.docVIP

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组培:无菌和人工控制环境条件下，用适当培养基，对离体植物器官组织c及原生质体培养，，使其再生c或完整植株。依据:植物c全能性。

细胞全能性：有完整c核的植物c具有全部遗传信息，在一定条件下有发育成完整植株的潜力。条件：组织器官离体；给予所需营养条件。

愈伤组织：在培养基上由培养物产生的无序生长且没有一定结构的薄壁c团。

外植体：组培中,植物体上取下来进行离体培养的组织器官。

脱分化：高度分化的植物器官组织或c，经离体培养，产生愈伤组织。

再分化：脱分化产生的愈伤组织重新分化成器官或组织。

初代培养：从大田取回第一次街道培养基上的培养。

继代培养：通过更换新培养基及不断切割分离进行的连续多代培养。

生根培养：很多无根材料要进行的培养。

实验室:准备室、无菌操作室、培养室和温室。

洗涤：重铬酸钾、洗涤剂、超声波洗净法。

灭菌:干热：鼓风干燥箱（烘箱）烘烤灭菌，150℃,2h玻璃器皿；湿热：高压蒸汽灭菌，121℃，0.1mpa，15-20min培养基；熏蒸：药物熏蒸，甲醛内加入KmnO4，百菌清，硫磺，培养室接种室；过滤：使溶液通过有微孔滤膜的漏斗，孔径0.3-0.45um，真空泵抽滤，滤液无菌，无菌液体培养（不耐高温活性物质）；药剂：表面消毒培养材料；灼烧：酒精灯灼烧，接种器具灭菌；射线：紫外线照射，15-30min，接种时关闭,室内灭菌。

无菌操作：工作人员准备；接种室及工作台灭菌，紫外30min；工作台消毒70%酒精；点燃酒精灯。

培养基：维持离体c生存生长的溶液。无机盐：大量元素：N：用量最多，硝态和铵态，KNO3,NH4NO3；P:参与能量贮存转化，核酸和蛋及c壁重要组分，磷酸根形式添加；K：调节c渗透压，促进胡萝卜不定胚分化；Ca，S,Mg：CaCl2，Ca（NO3）2，碳源，MgSO4作S源和Mg源；微量Fe、Mn、Zn、B、Mo、Cu、Co，需量甚微，稍多即毒害，Fe用量较多，促进组织中叶绿素合成和延伸伸长。2.有机化合物：糖类：合成有机物重要碳源、维持渗透压，常用：蔗糖（3%）、葡萄糖、果糖、麦芽糖；维生素类：直接参与酶合成,VB1、VB6、VB12、VB9（叶酸，促进培养物生长，参与嘌呤嘧啶合成）、肌醇（提高VB1效果，促进愈伤组织形成和不定芽、不定胚分化）；有机含氮化合物。3.植物生长调节物质：生长素：2,4-D促进愈伤组织，生长素/c分裂素，高利于生根；c分裂素：6-苄基腺嘌呤，根尖合成向上运输，促进c分裂和器官分化，促进侧芽分化生长，抑制顶端优势，延缓组织衰老；赤霉素（GA3）：促进器官形成；脱落酸（ABA）：抑制生长促进休眠，体胚发育成熟；多效唑(PP333)：促进壮苗。4.附加物：琼脂：组培支持物；琼脂糖:改善培养物供氧状况；聚乙烯吡咯烷酮（PVP）,VC,硝酸银，防止材料褐变；活性炭：吸附有害物；马铃薯提取液、香蕉乳、椰乳（缓冲）。

IAA：诱导脱分化产生愈伤，促进培养物生长，诱导不定胚。

MS培养基：无机盐浓度高，尤其铵盐硝酸银，能满足快速增长的组织对营养的要求，应用广泛。不适合生长缓慢、对无机盐浓度要求低的。

母液制备：大量元素母液：配置原溶液的10-50X，依次溶解，混合定容；微量元素母液（一般100X）；铁盐母液；有机物母液；生长调节物母液。注意：倍数不易过高，避免浪费，避免影响稀释准确度；2-4℃冰箱保存，配置时间不宜过长，否则易出现沉淀和微生物污染。配置过程：按配方浓度将母液实际用量依次加入大量筒，将蔗糖溶解加入，蒸馏水定容到所需V，加琼脂溶解，调整ph，氢氧化钠或稀盐酸进行调整，分装到培养器皿中，封口，高压锅灭菌。培养基制备：取出母液按序放好，将有机营养物质贮液溶化待用；取烧杯加纯水、母液；加生长调节剂和蔗糖，定容；倒入容器，加琼脂，加热使其溶解；调PH；培养基分装到培养皿；高压灭菌；冷却凝固

取材原则：再生能力强；遗传稳定性好；外植体来源丰富；外植体易灭菌。影响因素：部位，季节，器官生理状态和发育年龄，大小。

灭菌要求：消灭病毒，减少损伤。

污染类型：细菌，真菌。原因：培养基灭菌不彻底，操作人为带入，操作环节环境不清洁。控制：改善环境条件；严格执行灭菌操作；严查接种材料；常查灭菌设备；检查培养容器

消毒剂：70%-75%酒精，有较强穿透力和灭菌作用，杀伤作用大。次氯酸钠：较好的灭菌剂，释放出活性氯离子杀死细菌。1%，5-30min，灭菌力很强不易残留，对环境无害，碱性强，有破坏作用，处理时间不宜过长，漂白粉中为5%-10%或饱和溶液，效果好，是常用灭菌剂。升汞：常用0.1%-0.2%，2-15min，效果极佳，易残留，灭菌后应多次冲洗，危害大，毒性强，尽量避免使用。

器官再分化方式：器官发生型，胚胎发生型。

分类：据外植体来