梅花鹿胚胎冻存技术规范.docx

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梅花鹿胚胎冻存技术规范

1范围

本文件规定了梅花鹿胚胎冻存生产基本要求、超数排卵、采胚、检胚及冻前处理、胚胎冷冻与贮存。

本文件适用于梅花鹿胚胎的冷冻保存。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T25881牛胚胎

NY/T1900畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范

NY/T1674牛羊胚胎质量检测技术规程

3术语定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4基本要求

4.1人员

4.1.1由鹿保定人员、操作助手、采胚人员、胚胎检测人员组成。

4.1.2应具有一定的专业理论基础或现场工作经验，无人兽共患传染病。

4.1.3操作中应严格消毒，戴手套，穿工作服。

4.1.4应事先分工，操作过程中须密切配合。

4.2操作室

4.2.1应有采胚、检胚、冻胚的功能分区。

4.2.2应安全、通风、保温和卫生，设照明、电源插座和操作台，面积以15m2～25m2为

宜。

4.2.3墙壁、地面应采用便于消毒、防水的材质。

4.2.4操作前应采用无刺激性气味的消毒液和紫外线灯进行消毒杀菌。

4.3药品器械

4.3.1操作前备齐药品与器械，具体参见附录A。

4.3.2接触胚胎的器皿应清洁卫生。

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4.3.3消毒后的器械应用铝箔纸或封口纸封好备用。

4.4供体鹿

4.4.1健康无传染性疾病。

4.4.2无繁殖性疾病。

4.4.3生殖器官、机能正常。

4.4.4体况良好，中上等体况。

4.4.5经产，产后120天以上的母鹿。

5超数排卵

5.1宜9月~12月进行。

5.2超数排卵前应补饲20天以上，营养应全价均衡，主要补饲VA、VD、VE、Se、Zn等维生素和微量元素。

5.3程序

5.3.1宜采用CIDR+FSH方案，具体程序参见附录B。

5.3.2埋栓和取栓。埋置阴道栓CIDR（孕酮含量300mg），埋置当天记为第0天，第9天开始注射促卵泡素（FSH），以后每天早晚各注射1次，间隔12小时，4天8次等量或减

量注射，共注射FSH320mg，第7次注射FSH时取栓。

5.3.3人工输精。取栓后采用公鹿试情结合行为观察的方法进行发情鉴定，母鹿从接受试情公鹿爬跨到拒绝爬跨行为变的较安稳时进行第1次输精，间隔6h~8h进行第2次输精。

6采胚

6.1应在人工输精后6天~7天采集胚胎。

采胚操作前应按本文件4条款的要求提前准备器械药品，冲卵管须检查气囊是否漏气，冲胚液预热到35℃~37℃。

6.2对采胚鹿进行麻醉保定后运回采胚室，放于保定架上，呈前低后高呈仰卧保定姿势。

6.3宜采用手术法进行胚胎采集。

6.3.1术部备皮。术部位于腹部中线距乳房约4cm处，术前用刀片对术部进行备皮，用温水清洗，5%碘酊和75%酒精消毒。

6.3.2在腹部中线距乳房基部前4cm处做一切口，然后将两侧子宫角和输卵管暴露，用腹腔镜观察左右卵巢上的黄体发生情况并记录。

6.3.3在一侧子宫角基部用止血钳穿孔，插入冲胚管，由充气管注入5mL~10mL空气，使气囊封阻子宫腔；在子宫角和输卵管结合部的子宫角端插入套管针，拔出针芯，将装有PBS的50mL注射器接到套管针上然后注入35℃~37℃的PBS30mL~50mL，将胚胎从子宫角

的上端冲出，由冲胚管的出液孔收集于培养皿中，放气后取下冲胚管。

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6.3.4按6.3.3条款方法冲取另一侧子宫角的胚胎。

6.3.5冲胚完成后将子宫角放回体内，并用0.9%的生理盐水进行冲洗，并注入2mL石蜡液以防止生殖道粘连。

6.3.6缝合和消毒。左右子宫角创口各缝1针，腹膜和肌肉层连续缝合，皮肤结结缝合，用5%碘酊消毒。术后三天内每天注射2次抗生素。

7检胚及冻前处理

7.1检前处理

用20G针头的注射器吸20mL冲胚液从上向下冲洗集卵杯内侧的尼龙网4次~5次，清除杯中的泡沫后待检。

7.2镜检

7.2.1将回收冲胚液的平皿在10倍~20倍体视显微镜下，从上到下、从左到右或从外到内Z字形移动，用吸胚管将找到的胚胎移入培养