医学免疫学实验三 免疫标记技术、免疫细胞分离等.pptx

;实验三;（一）1、酶联免疫吸附试验（ELISA）;;;cellswithfluorescence;tuberclebacilluswithfluorescence;酶免疫技术;1）已知抗体包被

2）洗板

3）加待检抗原标本

4）洗板

5）加酶标记抗体

6）洗板

7）加底物显色，测定

(measurecolor)

;（一）免疫标记技术

1、酶联免疫吸附试验(ELISA)

------双抗体夹心法;（一）1、酶联免疫吸附试验（ELISA）;;;（一）2、斑点免疫层析试验

(dotgoldimmunochromatographicassay，DICA);;;;斑点免疫层析试验;;（二）1.外周血单个核细胞的分离

密度梯度离心法;离心前离心后

;Mainmethod:;[方法];[方法];Lymphocytes(淋巴细胞);Lymphocytes淋巴细胞;normalsmalllymphocyteinbloodsmear

(血片中淋巴细胞);（三）免疫细胞功能测定

1、E花环试验

原理：T细胞表面有绵羊红细胞受体（E受体）(CD2)，若T细胞与绵羊红细胞共同孵育，T细胞周围吸附绵羊红细胞，为花环形成细胞，

可用来鉴定和计数T细胞;;;rosetteformingcell;;（三）2、淋巴细胞转化试验;;;核分裂相细胞;转化的淋巴细胞包括以下三种细胞：

（1）淋巴母细胞：体积明显增大，为成熟淋巴细胞的3～4倍。核膜清晰，核染色质疏松，呈细网状。核内见明显核仁1～4。胞浆丰富，嗜碱性，有伪足样突出。胞浆内有时可见小空泡。

（2）过渡型淋巴细胞：具有上述淋巴母细胞的某些特征。核质疏松，可见核仁，胞浆增多，嗜碱性强。体积比小淋巴细胞大。

（3）核分裂相细胞：核呈有丝分裂，可见

许多对成堆或散在的染色体。;;;①untransformedlymphocyte,small

②transitionalcell③typicallymphoblast;untransformed

lymphocyte;核仁;;（四）结核病相关的免疫试验

(免疫学检测技术在疾病诊断中的应用举例);;;;;阳性的意义：阳性表示曾感染结核,不一定现在患病.

1.一般阳性和中度阳性：①结核病现症患者.②已受结核菌感染但并不意味着发病或患病.③卡介苗接种所致变态反应.④3岁内未接种卡介苗者提示体内存在结核病灶,应及时进行结核菌检查,影像学检查,血沉等检查??确定诊断和治疗.

2.强阳性：（1）结核病患者.（2）感染结核菌未发病者.强阳性人群结核病的发病率高,在未找到病变时可作预防性治疗.

3.如果2年内PPD试验结果由阴性（-）转为阳性（+）,或反应强度从原来硬结直径10mm增至10mm,提示新近感染过结核菌,或可能存在活动性病灶.

4.如用高稀释度（1IU）作皮试呈强阳性者，常提示体内有活动性结核灶。

;阴性的意义：

①表示未受结核菌感染.（未受感染或曾受感染但时间已久，反应消失者）

②婴幼儿PPD试验阴性应该及时接种卡介苗.

③免疫力低下（如免疫缺陷病）

④某些情况下不排除已受结核菌感染,如变态反应前期;患急性传染病,发热,使用免疫抑制剂等;免疫功能低下如重症结核病,慢性消耗性疾病,肿瘤,艾滋病,高龄等.

阴性也不表示没有结核感染.值得注意的是假阴性情况,在临床上有感染结核的确切依据而患者PPD试验却阴性,这种情况常见于以下疾病：初次感染结核菌4～8周以内,重度营养不良,恶性肿瘤,机体免疫缺陷性疾病（先天性免疫缺陷症,艾滋病）,免疫抑制剂使用者等,个别老年人因机体变态反应功能低下也常呈阴性反应.