基因工程(研究生).pptVIP

;;抗凝血酶;克隆猪，器官移植;远不仅如此;;改造环境;基因工程

〔geneticengineering〕;根本原理〔过程〕;主要内容;基因工程开展简史;基因工程开展简史;基因工程开展简史;?第一个重组体的构建

1972年，美国斯坦福大学P.Berg等在PNAS上发表了题为∶“BiochemicalmethodeforinsertingnewgeneticinformationintoDNAofSimianVirus40:circularSV40DNAmoleculescotaininglamdaphagegenesandthegalactoseoperonofEscherichiacoli.Proc.Natl.Acad.Sci.USA69:2904-2909,1972”，标志着基因工程技术的诞生。;第一个重组体构建;

;BoyerandCohen;基因工程开展简史;基因工程开展简史;基因工程开展简史;基因工程的流程(原理);1.确定研究的目标;2.选择、构建适宜的载体;2.选择、构建适宜的载体;2.选择、构建适宜的载体;质粒的根本条件;;原核表达载体---Pharmacia;原核表达载体---Promega;原核表达载体---Merck;原核表达载体—选择本卷须知;真核载体;真核载体---invitrogen;真核载体---clontech;真核载体---选择本卷须知;载体构建;pGL3-EnII-Pcore;;载体构建;载体构建;载体构建;载体构建;载体构建;载体构建;特定位点切除载体;λ噬菌体DNA改造系统

λgt系列〔插入型，适用cDNA克隆〕;λ噬菌体DNA改造系统

EMBL系列〔置换型，适用基因组克隆〕;M13噬菌体DNA改造系统〔含lacZ基因〕

M13mp系列

pUC系列;Phagedisplaytechnology;〔4〕.粘性质粒(cosmid);〔5〕酵母人工染色体

(yeastartificialchromosome,YAC);〔6〕细菌人工染色体

(bacterialartificialchromosome,BAC);〔7〕动物病毒DNA改造的载体

腺病毒;动物病毒DNA改造的载体

腺病毒;〔8〕动物病毒DNA改造的载体

慢病毒(HIV)----逆转录病毒(MMLV);植物载体;植物载体;3、目的基因获取;1、从文库中筛选;;〔2〕利用PCR技术扩增;3〕根据的氨基酸序列合成DNA法：;3〕根据的氨基酸序列合成DNA法：;4、目的基因与载体的连接;4、目的基因与载体的连接;4、目的基因与载体的连接;4、目的基因与载体的连接;4、目的基因与载体的连接;4、目的基因与载体的连接;4、目的基因与载体的连接;转——;方法;导入微生物细胞;导入动物细胞;导入植物细胞;6、重组子的筛选;测序;α互补;原核基因表达

可溶性表达问题

??达修饰问题

密码子偏性问题;真核基因表达

纯化难度大

产量低

本钱高;7、〔2〕目的基因表达纯化;7、〔2〕目的基因表达纯化;7、〔2〕目的基因表达纯化;三、基因工程的应用;重组DNA医药产品;植物工程;植物工程;基因治疗;;基因敲除根本原理;Thankyou