- 1、本文档共8页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
促红细胞生成素载体的构建、分离纯化及其活性检测
潘佳欣;高秀峰;赵佳浩;罗亚雄;吴晓婷;李永生
【摘要】目的为了进一步考察促红细胞生成素(EPO)的组织保护作用,构建了高效
表达人源性EPO(rhEPO)的原核表达载体,并通过小鼠体内实验考察了其捉红细胞
生成活性.方法构建原核表逸载俸pET30b(+)-rhEPO;转化至大肠杆菌BL21(DE3),
获得高效表达重组转化子菌株;Ni-NAT亲和层析纯化融合蛋白;利用网织红细胞指
数考察融合蛋白在小鼠体内的促红细胞活性.结果成功构建pET30b(+)-rhEPO重
组子;实现了在原核生物中的表达;纯化后的融合蛋白达到了电泳级纯;其相对分子质
量与理论值相符,原核表达的融合蛋白能够显著提高小鼠体内网织红细胞数,可溶性
融合蛋白和包涵体蛋白比活性分别是应用化学科1059.63、727.94U/mg.结论
构建和表达重组载体pET30b(+)-rhEPO,表达的目的蛋白经分离纯化后具有体内生
物学活性,为进一步的功能研究奠定基础.
【期刊名称】《重庆医学》
【年(卷),期】2016(045)028
【总页数】3页(P3913-3915)
【关键词】红细胞生成素;遗传载体;分离和提纯;活性检测
【作者】潘佳欣;高秀峰;赵佳浩;罗亚雄;吴晓婷;李永生
【作者单位】四川大学华西基础医学与法医学院,成都610065;四川大学华西基础
医学与法医学院,成都610065;四川大学华西基础医学与法医学院,成都610065;四
川大学华西基础医学与法医学院,成都610065;四川大学华西基础医学与法医学院,
成都610065;四川大学化学工程学院,成都610065
【正文语种】中文
【中图分类】R34
摘要[]目的为了进一步考察促红细胞生成素(EPO)的组织保护作用,构建了高效表
达人源性EPO(rhEPO)的原核表达载体,并通过小鼠体内实验考察了其促红细胞生
成活性。方法构建原核表达载体pET30b(+)-rhEPO;转化至大肠杆菌
BL21(DE3),获得高效表达重组转化子菌株;Ni-NAT亲和层析纯化融合蛋白;利
用网织红细胞指数考察融合蛋白在小鼠体内的促红细胞活性。结果成功构建
pET30b(+)-rhEPO重组子;实现了在原核生物中的表达;纯化后的融合蛋白达到
了电泳级纯;其相对分子质量与理论值相符,原核表达的融合蛋白能够显著提高小
鼠体内网织红细胞数,可溶性融合蛋白和包涵体蛋白比活性分别是应用化学科1
059.63、727.94U/mg。结论构建和表达重组载体pET30b(+)-rhEPO,表达的
目的蛋白经分离纯化后具有体内生物学活性,为进一步的功能研究奠定基础。
[Abstract]ObjectiveToconstructtheefficientexpressionvectorofthe
human-derivederythropoietin,andinvestigateitsinvivoactivitythrough
experimentinmice,inordertostudythetissuesprotectivefunctionforthe
furtherresearch.MethodsProkaryoticexpressionvectorpET30b(+)-rhEPO
wasconstructed,transformedintoE.coliBL21(DE3),toobtainlow-costand
efficientexpressionofrecombinanttransformantstrains,fusionprotein
purificatedbyNi-NATaffinitychromatographycolumn,andinvivoactivity
detectedthroughanimalexperiment.ResultsSuccessfullyconstructed
pET30b(+)-rhEPOprokaryoticexpressionvector,andrealizedthe
expressioninprokaryotes.Thepurifiedfusionproteinshowedexpected
molecularw
文档评论(0)