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基因工程乙肝疫苗的制备

基因工程乙肝疫苗的制备

【摘要】基因工程乙肝疫苗是通过构建含有乙肝

表面抗原的重组质粒转染酵母细胞，制备乙肝病

毒表面的有效蛋白。本文主要介绍基因工程疫苗

--重组酵母乙肝疫苗制备的基本原理和工艺流

程，以及乙肝疫苗的纯度分析方法。

【关键词】乙肝疫苗重组质粒工艺流程

1.基因工程乙肝疫苗产生背景

疫苗是人类目前可以彻底消灭某一疾病的唯

一武器，接种疫苗被认为是最有效、最经济的疾

病预防手段。《发展中国家消灭乙型肝炎免疫接

种计划实施指南》中指出：“世界上四分之三的

人口生活在中或高乙肝流行区，因此，唯一的策

略就是有效地减少乙肝的流行，最终消灭乙

肝······”

世界卫生组织肝炎专家及计划免疫全球咨询

组认为：控制全球乙型肝炎及减少死亡的策略是

开展大规模的婴儿及学龄前儿童的乙肝疫苗接

种。

我国卫生部制定的目标是从92年开始在全国

逐步推行乙型肝炎（HB）计划免疫。92年全国

共生产血源疫苗1500万人份，尚不能满足新生

这些颗粒含有未糖基化的HBsAg多肽和主要

由酵母特有的磷脂构成的脂基。其氨基酸的构

成、羟基和氨基酸末端序列分析、质谱仪分析的

肽谱等表明，重组酵母忠实地表达和生产了

HBsAg。

酵母生产的HBsAg在细胞内以颗粒形式存

在，其中的亚单位通过非共价键不紧密地结合在

一起。在细胞外它转变成第二种形式，即单个多

肽通过二硫键结合成二聚体，最后二聚体之间形

成二硫键，得到二硫键交联的颗粒。它在表观上、

化学性质和免疫性等方面都与血源HBsAg类

似。

HBsAg比大部分生物分子要大，但比细胞要

小，很适宜用膜分离方法纯化。

HBsAg表现出很强的疏水性，可用硫酸铵或

聚乙二醇进行分步沉淀，或用疏水层析纯化。

HBsAg含有大量的二硫键，是其对热稳定的

主要原因。在制备血源疫苗时，可运用长时间保

温法以灭活HBV。但在制备重组HBsAg时没有

必要。可选用更加温和的条件。

HBsAg对蛋白酶的抵抗力很强，可在pH为2

的时候耐胰蛋白酶的处理。

HBsAg因其脂含量高，密度比一般蛋白低。

利用其密度特性，可进行梯度离心分离。

4.疫苗的工作原理

任何疾病的疫苗都遵循以下免疫原理：

（1）.将疫苗注射到人体内，疫苗通常含有已经

死亡或者弱化的病毒。而乙肝疫苗就是一类没有

感染能力的病毒蛋白，能引起机体的特异性反

应。

（2）.免疫系统识别出体内的外来物质（病毒和

细菌），这些外来物质也被称之为抗原。

（3）.一旦发现抗原，免疫系统就分泌出被称为

抗体的蛋白质。这些蛋白质在血液中流动，将抗

原杀死以消灭身体感染的病毒（或者与病毒蛋白

质特异性结合，使之失去生物活性）。抗体是由

淋巴细胞制造的。这些细胞也被称为B细胞，它

的主要功能是产生能够特异性与抗原结合的抗

体。

（4）.人体会储存这些抗体，淋巴细胞也会有记

忆这种特殊抗原的功能。所以再次染病时，它们

会及时消灭此种疾病的病毒，然而抗体的针对性

很强，所以曾经接种过乙肝疫苗的人，面对其他

疾病时仍旧会感染（值得注意的是：当人体感染

真正的病毒时，抗体会不停繁殖，直到病毒最终

被消灭。而疫苗会提供数量恰到好处的抗原，以

帮助人体完成识别病毒和免疫反应的过程，从而

使人体能够对这种病毒免疫）。

5.疫苗制备工艺

5.1.菌种制备和发酵

用成功构造的基因工程菌进行扩大培养，经

过逐级放大至发酵罐。发酵过程应该具有下列特

点：原料以碳水化合物为主，不含有毒物质，并

加入少量有机和无机氮源；能容易进行大量有效

的乙肝病毒表面抗原的生产；生物反应过程是以

生命体的自动调节方式进行的，多个反应像一个

反应一样，在单一设备中进行；生产过程中，通

常常温进行，操作温和，不考虑防爆问题；能够

高度选择性的进行复杂化合物在特定部分的反

应，如氧化、还原、官能团导入；生产过程中考

虑防止杂菌的污染。

发酵过程中，可采用分批补料或连续流加补

料以保证最优生长和维持细胞浓度、生长速度和

营养供应之间的适当平衡。可添加诱导剂如乳糖

到发酵液中去以诱导可调节启动子的表