多聚酶链式反应(PCR)-扩增DNA片段.pptVIP

多聚酶链式反响〔PCR〕

扩增DNA片段;一、实验目的;二、实验原理

;PCR的根本原理;(二)

PCR的反响过程;;三、实验材料、器材及试剂

;PCR反响体系的五要素：

引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

TaqDNA聚合酶

来自水生栖热菌Thermusaquaticus

良好的耐热性

Mg2+依赖性

无校读功能;dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate〔三磷酸脱氧核糖核苷〕的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,dUTP等在内的统称，N代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA、RNA合成中，以及各种PCR〔RT-PCR、Real-timePCR〕中;

;无菌薄壁管中顺序参加反响体系各成分:

双/三蒸水 ?l

10×缓冲液 2.5?l

25mmol/LMg2+ 2.5?l

4×dNTP 2.0?l

50umol/L引物1 2.0?l

50umol/L引物2 2.0?l

模板DNA 1-2?l

TaqDNA多聚酶 1.0?l

25.0?l

轻弹管壁，使各成分充分混匀！

;实验操作〔2〕;操作提示;2.PCR产物的检测

;电泳结果有无目标条带出现，可判别+/-结果；

根据条带宽度和亮度，可直观判断扩增产量；

关于PCR假阴性、假阳性及非特异扩增问题。;PCR扩增NGF基因〔大鼠〕;DNAMarker;关于PCR假阴性、假阳性问题;关于PCR非特异性扩增问题：;实验延伸;逆转录PCR(RT-PCR);巢式PCR;反向PCR;差示PCR〔DD-PCR);DNA分子在电泳中的行为取决于分子量

和分子构象。

DNA单链的构象取决于序列。

PCR产物变形后于中性胶中电泳，与正常

对照比较，假设电泳行为异常，那么认为内含

突变的碱基。;PCR引物设计;引物设计：;

使用blast程序，输入引物序列，

等待结果报告。;

primer/primer3_cgi

?;PCR的反响特点;五、本卷须知

;普通高中课程

标准实验教科书 生物选修1

生物技术实践 ;专题4DNA与蛋白质技术

课题2多聚酶链式反响扩增DNA片段;课题2

多聚酶链式反响扩增DNA片段;一、课题目标;二、课题重点与难点

;三、课题背景分析;四、根底知识分析与教学建议

;〔一〕PCR原理教学建议：;〔一〕PCR原理教学建议：;〔二〕PCR的反响过程;〔二〕PCR的反响过程教学建议：;(一)PCR原理;解链→模板变性

引物-起始→引物-模板复性

子链延伸→子链延伸;Hotwaterbacteria:

Thermusaquaticus

TaqDNApolymerase;加样器的使用;结果分析与评价;网站链接;PCR应用相关文章及链接：;MolecularGeneticMethods-LectureTopics Chapter

PolymeraseChainReaction(PCR) 7

DNAsequencing(manual/automated) 7

DNAFingerprinting(DNAtyping/profiling) 8

Singlenucleotidepolymorphisms(SNPs) 9

;PracticalapplicationsofPCR,Sequencing,Fingerprinting,SNPs:

AmplifyDNAforCloning(PCR)

AmplifyDNAforsequencingwithoutcloning(PCR)

DNAsequencingreaction(PCR)

Mappinggenesandregulatorysequences

Linkageanalysis(identifygenesfortraits/diseases)

Diagnosedisease

Pathogenscreening

Sexdetermination

Forensicanalysis

Paternity/maternity(relatedness)

Behavioralecologystudies(relatedness)

Molecularsystematicsandevolution(comparinghomologoussequencesindiffe