免疫组化操作步骤.pdf

免疫组化操作步媒

一免疫纪化〈《LP法)操作步骤:

1切片常规脱蜡至水。如索抗片收复，可在此步后进行

2.缓冲液沈3min/2次。

3.为了降低内浙性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在Hydrogen

PeroxideBleck中财育10-15分钟。

4.缓冲液洗5min/2次。

5.滴如UltraVBlock，在窗浊下旷育5分钟以封闭非特异性的背景染色。

UGR而则会导致特措性染色降低.如果，抗的稀释液中含有5一

10s6正常丫血消，这一步可以省咯。)

6.缓冲液洗5min/2次。

7.滴加抗工作液37尼贱育1一2小时。(其体凡育时间和温度出试验者最终次定》

8.缓冲液尝5min/2次。

9.滴如PrimaryAntibodyEnhancerl增强子),在宣济下贱育20分钟。

10.缓冲液洗5min/2次。

11，滴加HRPPolymer(抗)，在室温下多方30分钟。

(注。HRPPolymer对光和做感，应避免不必旧的光暴露并储在在不透明的小瓶中,)

12.组冲液尝5min/2次。

13.向1mlDABPlusSubstrate(或AECPlusSubstrate)中滴加1-2滴DABPlus

Chromogen《或AECPlusChromogen)，混勾后滴如到切片上,孵育3一15分钟。

(基体时间山染色深浅次定。)

14.上犁来水充分冲洗，复染，脱水，透明，圭片。

二.免疫纽化{三步法)操作步骤:

(1T)》、石蜡切片脱虹全水。

(2)、，3%H2O2宣油是育5-10分钟，以消除内涉性过氧化物酶的活性。

〈《3)、蒸饮水冲洗，PBS浸泡5分钟x2《如需抗原收复，可在此步帮进行)。

(4)》、5-1039正常山羊血消〈《PBS稀释)封闭，室温解育10分钟，倾去血洗，勿

洗。滴加一扩工作液，37尼及育1-2小时或4它过夜。

(5)、PBS冲洗，5分钟x3次。

〈《6)、滴加适量生物素标记.抗.[作液，37位解育10-30分钟。

(7)、，PBS冲洗，5分钟x3次。

(8)、滴加适量的辣根酶或碱性博酸酶体记的链索卵鼎素工作液，37吕旷育10-30

分钟。

(9)、，PBS冲洗，5分钟x3次。

〈《10》、显色剂显色3-15分钟(DAB或NBTBCIP)

《11入口来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。

三.冰冻切片免疫组化染色步骤;

冰冻切片4-8um，室温放置30分钟后，入4尼丙酮问定10分钟，PBS尝，5分钟x3，

用过氧化分旺育5-10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。以下辣石蜡切片免疫纽化