pcr技术课件ppt简短.pptx

pcr技术课件ppt简短

pcr技术简介pcr技术的基本步骤pcr技术的实验流程pcr技术的注意事项pcr技术的优缺点contents目录

pcr技术简介01CATALOGUE

核酸变性引物与DNA的结合产物分析循环延伸核酸分离和纯化pcr技术的基本原理

1983年由KaryMullis发明，应用热循环技术实现DNA的指数级扩增。基础PCR1993年，DavidR.Higuchi在TaqMan的基础上开发出实时PCR技术，能够实时监测反应进程。实时PCR1995年，LaryK可通过多重PCR同时检测多个基因位点。多重PCR2001年，ABIPRISM3700DNAAnalyzer推出，实现了高通量PCR检测。高通量PCRpcr技术的发展历程

基因克隆、基因表达、基因组测序、单核苷酸多态性(SNP)检测等。基础研究医学诊断生物多样性研究感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤等疾病的诊断。物种鉴定、种群遗传学分析、生态学研究等。030201pcr技术的应用范围

pcr技术的基本步骤02CATALOGUE

选择合适的样本类型，如血液、组织等，以便后续实验操作。样本类型采集样本时需遵循无菌操作原则，确保样本质量。样本采集存储样本时需选择适当的存储方式，以保持样本的稳定性。样本存储样本准备

通过化学或物理方法裂解细胞，释放出基因组DNA。细胞裂解采用特殊的缓冲液和洗涤剂去除杂质，纯化DNA。DNA纯化通过电泳或紫外分光光度法检测DNA质量，确保其纯度和浓度符合要求。DNA质量检测基因组DNA的提取

循环扩增反复进行变性、引物结合和DNA合成步骤，使目标基因片段得到指数级扩增。DNA合成在DNA聚合酶的作用下，按照模板DNA序列合成新的DNA片段。引物结合引物与DNA模板结合，为后续的DNA合成提供起始点。引物设计根据目标基因序列设计特异性引物，以便扩增出目标基因片段。DNA变性加热使DNA双链解开，暴露出碱基对。pcr扩增

荧光定量PCR利用荧光定量PCR仪进行定量分析，测定目标基因片段的拷贝数或相对表达量。电泳分析将PCR产物进行电泳，根据迁移率判断目标基因片段的大小和纯度。序列分析对PCR产物进行测序，确定目标基因序列是否与参考基因序列一致。产物检测和分析

pcr技术的实验流程03CATALOGUE

明确实验目标和检测样本，如临床样本、环境样本等。确定实验目的和样本根据目标基因序列设计PCR引物。设计引物确定反应体系中所需的试剂和浓度。选择合适的PCR反应体系根据目标基因序列和引物组合设定PCR仪的反应程序。设定PCR仪的反应程序实验前准备

提取、纯化样本DNA，去除杂质和干扰。样本处理构建PCR反应体系进行PCR扩增产物检测和分析将DNA模板、引物、dNTPs、酶等试剂加入PCR反应管中。将PCR反应管放入PCR仪中，按照设定的程序进行扩增。收集PCR扩增产物，进行电泳分析或荧光定量PCR等检测方法，确定目标基因序列是否被成功扩增。操作步骤

引物和反应体系的优化根据实验结果对引物和反应体系进行优化，提高PCR扩增效率和特异性。样品处理和储存对使用过的样本进行妥善处理，并储存未使用的样本以备后续使用。数据分析和结论对实验数据进行统计和分析，得出结论。实验后处理

pcr技术的注意事项04CATALOGUE

明确实验的目的和预期结果，并熟悉PCR仪的使用步骤。确认实验目的和步骤根据目的基因序列，选择特异性好、扩增效率高的引物。选择合适的引物确保使用的模板DNA无降解、无污染，浓度和纯度适中。确认模板DNA的质量根据引物、模板和PCR仪的规格，设置合理的反应体系。设置合理的反应体系实验前的注意事项

控制好反应温度和时间PCR反应中，每个温度点的反应时间和升温/降温速度应保持一致。避免出现非特异性扩增通过优化反应条件和引物设计，减少非特异性扩增的产生。注意观察荧光信号的变化在实时PCR过程中，密切观察荧光信号的变化，确保反应正常进行。避免样品交叉污染每次实验前，彻底清洗PCR仪和管路，避免样品间的交叉污染。实验中的注意事项

根据实验数据，进行定量和定性分析，并处理异常值。数据分析与处理将用过的引物和模板妥善储存，以备后续实验使用。引物和模板的储存定期对PCR仪进行维护和保养，确保设备的正常运行。仪器的维护与保养实验后的注意事项

pcr技术的优缺点05CATALOGUE

灵敏度高特异性强操作简便应用广泛优CR技术可以检测出微量的DNA，灵敏度非常高。通过设计特异性的引物，PCR技术可以特异地扩增目标DNA片段，不扩增其他非目标DNA。PCR技术流程相对固定，操作相对简单，易于标准化和自动化。PCR技术广泛应用于生物医学、分子生物学、基因组学等领域。

PCR技术需要使用大量的DNA模板，容易造成实验室内的交叉污染，影响