微小RNA及其在医学中的应用.ppt

miRNAs与肿瘤的关系miRNA与疾病关系的研究策略哪些miRNA表达miRNA文库筛选分离,克隆,测序miRNA表达谱分析哪些基因是miRNA的靶基因哪些重要的miRNA影响到某种生命活动miRNA在什么时候、在哪里表达功能分析治疗诊断(一)胃癌概述胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。中老年发病较多，男女比例约2比1全球肿瘤发病和癌症死亡率的第二位。微小RNA与胃癌的关系微小RNA及其在医学中的应用一、微小RNA的发现人类基因组中，蛋白质编码区只占1-2％。其它98％的基因组有什么功能呢？约24％为内含子序列，这么冗长的内含子序列有什么生物学功能呢？后基因组时代的中心法则RNA加工基因调节DNA修复和重组基因组的保持基因组的表达后基因组时代的基因调控：RNA调控人类基因组绝大部分被转录成RNA非编码RNA的数量是编码RNA的数百倍生物体复杂性被隐藏在它们所输出的非编码RNA内，而非编码序列内。2006年的诺贝尔生理学奖获得者：AndrewZ.FireCraigC.Mello微小RNA（microRNA,miRNA）的发现第一个被发现的miRNA(lin-4)由哈佛大学的VictorAmbros发现的（1993）第二个被发现的miRNA（let-7）由哈佛大学的博士后FrankSlack(Ruvkun实验室）发现的（2000)VictorAmbrosGaryRuvkun第一个被发现的miRNA:lin-4RuvkunG,WightmanB,HaI.The20yearsittooktorecognizetheimportanceoftinyRNAs.Cell.2004Jan23;116(2Suppl):S93-6.LeeR,FeinbaumR,AmbrosV.AshorthistoryofashortRNA.Cell.2004Jan23;116(2Suppl):S89-92近年来被鉴定的miRNAs越来越多至今超过17000miRNAs已被发现可以免费获得http:///sequences/二、微小RNA的特点５’端２-８个核苷酸高度保守，主要作用在靶mRNA的３’端非翻译区（unstranslatedregion,UTR）是翻译抑制还是剪切mRNA，除配对因素外，还取决于RISC中组装元件的功能，如Arg蛋白主要是在蛋白质水平调控分完全和不完全配对两种方式，哺乳动物主要为不完全配对结合，影响mRNA的成熟、转运、稳定性或者在直接调控翻译01020304微小RNA的作用特点小干扰RNA（smallinterferingRNA;siRNA）和微小RNA的异同点siRNA和miRNA的相同点相同点siRNAmiRNA长度22nt左右合成的底物由双链RNA或RNA前体形成的Dicer酶是Dicer的产物Argonaute家族需要Argonaute家族蛋白参与蛋白RISC组分都是RISC组分，其功能界限变得不清晰，如二者在介导沉默机制上有重叠作用方式在转录水平后和翻译水平起作用不同点siRNAmiRNA机制性质外源引起，如病毒感染诱导产生，异常情况生物体自身的正常调控机制直接来源长链双链RNA发夹miRNA前体分子结构双链RNA单链RNA对靶RNA特异性较高相对较低互补性一般要求完全互补不完全互补，存在错配现象生物学功能抵抗病毒感染；沉默过分表达的mRNA；保护基因组免受转座子的破坏对机体生长发育，神经分化，脂类代谢，细胞增殖分化，肿瘤发生有重要作用三、微小RNA的主要功能分化凋亡发育增殖(干细胞)miRNA疾病VictorR.Ambros1.调控发育过程秀丽线虫C.elegansmiRNA的表达具有组织特异性miR-124a局限表达于神经组织miR-1局限表达于骨骼肌和心肌青鳉斑马鱼小鼠果蝇2.调控细胞分化3种miRNA控制造血干细胞向淋巴细胞的分化过程(Science2004)3.miRNAs与心血管疾病（调控心肌前体细胞

的增殖）4、miRNA与病毒感染microRNAhostorvirus禽流感病毒Avianinfluenzavirus疱疹病毒家族EBV,KSHV,MHV-68,HCMV,HSV-1HBV,H