硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞乙酰肝素酶表达及迁移能力的影响.pdfVIP

硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞乙酰肝素酶表达及迁移能力的影

响

郑冬;袁梅;李娟;谷景立;卢博;刘俊茹;黄蓓晖

【摘要】目的:研究硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞株U266的乙酰肝素酶(HPA)表

达及迁移能力的影响,并探讨其作用机制.方法:体外培养U266细胞,以不同浓度的硼

替佐米进行处理,采用CCK-8检测细胞活力,用RT-PCR方法检测HPAmRNA水

平的变化,用Westernblotting方法检测HPA蛋白及IκB表达水平的变化,以

Transwell方法检测细胞迁移能力的变化.结果:U266细胞表达HPA,以0、3.125、

12.5及50nmol/L浓度的硼替佐米处理U266细胞48h,HPAmRNA及蛋白的表

达逐渐减少(P0.01),而细胞迁移能力逐渐减弱(P0.01).同时,HPA的蛋白表达水

平与IκB的表达水平呈负相关(P0.01).结论:硼替佐米通过抑制HPA的表达抑制

骨髓瘤细胞的迁移能力,其机制可能是通过NF-κB信号途径进行调控的.

【期刊名称】《中国病理生理杂志》

【年(卷),期】2011(027)005

【总页数】4页(P865-868)

【关键词】硼替佐米;多发性骨髓瘤;乙酰肝素酶;细胞迁移

【作者】郑冬;袁梅;李娟;谷景立;卢博;刘俊茹;黄蓓晖

【作者单位】中山大学附属第一医院血液内科,广东,广州,510080;中山大学附属第

一医院血液内科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院血液内科,广东,广

州,510080;中山大学附属第一医院血液内科,广东,广州,510080;中山大学附属第一

医院血液内科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院血液内科,广东,广

州,510080;中山大学附属第一医院血液内科,广东,广州,510080

【正文语种】中文

【中图分类】R733.3

多发性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)是一种恶性浆细胞增殖性疾病，在血液

肿瘤性疾病中占10％。新药硼替佐米近年来在MM的治疗取得了重大突破，使骨

髓瘤患者的疗效有了明显改善[1]。已知晓乙酰肝素酶(heparanase，HPA)是一种

与肿瘤细胞生长及转移密切相关的葡萄糖醛酸酯酶[2]，研究发现，HPA在MM

的患者中呈现高表达，且表达水平与患者预后密切相关[3-5]。硼替佐米是否同样

能影响骨髓瘤细胞HPA的表达，进而减弱其迁移能力，从而抑制骨髓瘤细胞的生

长和转移，尚有待进一步研究。本研究探讨了硼替佐米对骨髓瘤细胞株U266的

HPA表达及迁移能力的影响，期望发现硼替佐米作用于骨髓瘤细胞的新途径。

1细胞和试剂

人MM细胞系U266由第二军医大学长征医院血液科侯健教授惠赠，Cell

CountingKit-8(CCK-8)试剂盒购自日本株式会社同仁化学研究所，Trizol试剂购

自Invitrogen公司，反转录试剂盒和Taq酶购自Toyobo公司，PCR引物由

TaKaRa公司合成，HPA兔抗人多克隆抗体及IκB兔抗人多克隆抗体购自Santa

Cruz，GAPDH兔抗人单克隆抗体及羊抗IgG/HRPⅡ抗购自博奥申公司，

Transwell板(8μm孔径)购于Corning。

2细胞培养

用含10％的胎牛血清、1×105U/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI-1640培

养基，在37℃、5％CO2的饱和湿度培养箱中培养，选用对数生长期细胞进行实

验。

3药物干预

硼替佐米粉剂溶解于生理盐水中，将其浓度配置为100μmol/L(母液)，使用

RPMI-1640培养基将其稀释成终浓度为：3.125、6.25、12.5、25、50nmol/L，

未加入硼替佐米药物的即为对照组，每个实验浓度组各设3个复孔。每次实验重

复3次。

4CCK-8检测细胞活力

将收集的细胞稀释为6×107cells/L，分别接种50μL于96孔板中，3×104

cells/well，每孔分别加入配置好的不同浓度的硼替佐米(0、3.125、6.25、12.5、

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