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01基因工程挖空练
基因工程是在分子水平上进行操作的;基因工程的原理是基因重组。
基因工程的优点:①克服远缘杂交不亲和的障碍,②目的性强,能定向改变生物的遗传性状。
限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。功能是:它们能够识别双链DNA分子的某种特定的脱氧核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。可切割产生黏性末端和平末端两种形式的末端。
DNA连接酶分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。作用实质:恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。能连接两种末端的DNA连接酶是T4DNA连接酶。
常用的载体为质粒,其化学本质是环状的DNA。除此以外还有还有
动植物病毒和λ噬菌体的衍生物也可以作为基因工程的载体。
载体必须具备的条件:①能在受体细胞中保存下来并能自我复制;②具有1个或多个限制酶切割位点,以便与外源基因连接。③具有标记基因。
依次写出基因工程的四个步骤:(并用√标明核心步骤)
①目的基因的获取②基因表达载体的构建(核心、关键步骤)
③将目的基因导入受体细胞④目的基因的检测与鉴定
8、为什么同一基因在不同生物体内表达的产物相同?所有生物共用一套密码子。
9、为什么两种不同生物的DNA能拼接在一起?都具有相同的结构和化学组成。
10、获取目的基因的常用方法有:①从基因文库中获取目的基因
②利用PCR技术扩增目的基因③化学方法人工合成
11、基因文库包括基因组文库和部分基因文库(不能答cDNA文库)。
12、构建cDNA文库:用某种发育的某个时期的mRNA在逆转录酶的作用下合成cDNA片段,与载体连接后储存在受体菌群中。
13、构建基因组文库:将某种生物体内的全部DNA提取出来,选用适当的限制酶将其切成一定范围大小的片段。……
14、PCR技术的原理DNA双链复制,前提是:有一段已知目的基因的脱氧核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物。
15、PCR技术的过程(写温度):变性(90—95℃)、复性(55—60℃)、延伸(70—75℃)。
16、PCR技术的条件:①目的基因DNA模板、②引物、③4种脱氧核苷酸(dNTP)、④热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。
17、构建基因表达载体的目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。
18、基因表达载体的组成必须有目的基因、启动子、终止子、标记基因。
19、启动子位于目的基因的首端,它具有RNA聚合酶识别和结合的部位。
20、标记基因的作用:鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。(或供重组DNA的鉴定和选择)。
21、将目的基因导入植物细胞最常用的方法:农杆菌转化法,适用于双子叶和裸子植物。除此以外还有花粉管通道法(我国独创)和基因枪法(成本高)。
22、植物体受到损伤时,伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物,吸引农杆菌移向这些细胞,这时农杆菌中的Ti质粒上的TDNA可转移至受体细胞,并整合受体细胞染色体DNA上。
23、将目的基因导入动物细胞采用最多的方法是显微注射法。
24、什么是cDNA:mRNA在逆转录酶的作用下合成的DNA。
25、将目的基因导入原核细胞常用的方法是用Ga2+处理原核细胞,使其成为感受态(能够吸收周围DNA分子的状态)细胞。
26、①检测目的基因是否表达的方法:抗原—抗体杂交。
②检测目的基因是否插入到受体细胞的方法:DNA分子杂交。
③检测目的基因是否转录的方法:分子杂交。
27、DNA分子探针:用放射性同位素等标记含有目的基因的DNA片段。
28、一个抗虫基因导入植物细胞后是否赋予了植物抗虫特性,需要做抗虫接种实验。
29、目的基因能否在受体细胞中维持稳定和遗传的关键:目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA上。
30、乳腺生物反应器是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,通过显微注射方法导入到雌(“雌”或“雄”)性哺乳动物的受精卵中,然后送入母体,使其生长发育为转基因动物。
31、基因治疗包括体外基因治疗和体内基因治疗。
32、蛋白质工程的基本途径:从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构
→推测应有的氨基酸序列→找到相应的脱氧核苷酸序列。
33、蛋白质工程指以蛋白质分子结构规律及其与功能关系作为基础,通过基因
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