血液学检验技术 课件 4.项目四：细胞化学染色.pptx

单元一：造血细胞检验

项目四：细胞化学染色;任务一细胞化学染色基本理论;项目四：细胞化学染色;;细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学，是以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学成分(如酶类、酯类、铁、蛋白质、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。

细胞化学染色主要用于：

1.辅助判断急性白血病的细胞类型。

2.辅助血液系统疾病的诊断和鉴别诊断，如铁染色。

3.观察疾病的疗效和预后。

4.发病机制的探讨。;固定;粗略估量;;原理（二氨基联苯胺法）：

操作：;结果判断：细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性反应;正常细胞POX染色反应;临床意义：主要用于鉴别急性白血病类型

1.急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和M2型反应最强，M1和M5型反应较弱，故有助于区别M3和M5型。

2.急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，或阳性原始细胞＜3%（可能是残留的原粒或早幼粒细胞），故为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重要指标。;原理：

苏丹黑是一种脂溶性重氮染料，能溶解于细胞内的含脂结构（如中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇）中，使脂类物质呈棕黑色或深黑色而显示出来。脂类物质在粒细胞中含量丰富，在单核细胞中也有少量。

结果判断及正常细胞染色反应：与POX染色基本一致

临床意义：与POX染色基本相似;

酯酶是分解各种酯类的水解酶，根据机制的不同，分为非特异性酯酶和特异性酯酶。

特异性酯酶易水解具有长链的酯类。非特异性酯酶易水解具有短链的酯类。

单核巨噬细胞类为非特异性酯酶，中性粒细胞类则为特异性酯酶。

区分单核细胞类或中性粒细胞类的重要方法，特别是二重染色法尤为重要。;（一）特异性酯酶染色—氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS-DCE）

氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）几乎只出现在粒细胞中，特异性高，故称“粒细胞酯酶”、“特异性酯酶”。

原理：氯乙酸AS-D萘酚被细胞内特异性酯酶水解，产生AS-D萘酚，再与稳定的重氮盐（坚牢紫酱GBC)偶联，生成不溶性红色沉淀，定位于胞浆中。;（一）特异性酯酶染色—氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS-DCE）

操作：

结果判断：胞质内出现红色弥漫性或颗粒状沉淀为阳性

;细胞系统;（一）特异性酯酶染色—氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS-DCE）

临床意义：主要用于鉴别急性白血病类型;（二）非特异性酯酶染色—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）

α-NAE存在于单核细胞、粒细胞和淋巴细胞中，是一种中性非特异性的酯酶，只有单核系细胞的阳性可被氟化钠抑制，故α-NAE染色+氟化钠抑制试验，对鉴别单核细胞白血病有重要价值。

原理：;（二）非特异性酯酶染色—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）

操作：;（二）非特异性酯酶染色—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）

结果判断：胞质内有灰黑色或棕黑色弥漫状或颗粒状沉淀为阳性;（二）非特异性酯酶染色—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）

正常细胞NAS-DCE染色反应：;（1）急性单核细胞白血病时，α-NAE染色呈明显阳性反应，且其阳性反应被氟化钠抑制。

（2）急性粒-单核细胞白血病时；α-NAE染色呈部分阳性，并被氟化钠抑制。

（3）急性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病时，α-NAE染色呈阴性或（弱）阳性，且其阳性反应不被氟化钠抑制。;（三）非特异性酯酶染色—α-丁酸萘酚酯酶染色（α-NBE）

α-NBE在单核-吞噬细胞系统中活性最强，能被氟化钠抑制，而粒系、淋巴系、部分幼红细胞、巨核细胞和血小板等含量很少，被视为单核-吞噬细胞系统所特有的标志酶。

原理：;（三）非特异性酯酶染色—α-丁酸萘酚酯酶染色（α-NBE）

操作与结果判断：基本同α-NAE一致

正常细胞α-NBE染色反应：

临床意义：临床应用同α-NAE;;酸性磷酸酶（ACP）存在于细胞的溶酶体颗粒中，某些细胞中的酸性磷酸酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性磷酸酶染色有助于某些疾病的诊断及鉴别诊断。

原理：血细胞内的酸性磷酸酶在酸性（pH5.0）条件下水解基质液中的磷酸萘酚AS-BI，释放出萘酚AS-BI，后者与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。;试剂：

操作：;结果判断：胞质中出现鲜红色颗粒沉淀为阳性

正常血细胞的染色反应：粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞均呈阳性反应。;临床意义：临床ACP染色应用较少，主要用于多毛细胞白血病的诊断及脂质代谢障碍性疾病的鉴别。;原理：过碘酸是氧化剂，能使含有乙二醇基（CHOH-CHOH）的多糖类物质（糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白及糖酯等）氧化，形成双醛基（CHO-CHO）