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欧李ChPSY基因的原核表达

陈俊奇;王鹏飞;杜俊杰;李润丰;洪文泓;李佩;马精选;张建成

【摘要】为了解欧李果实类胡萝卜素合成过程中八氢番茄红素合成酶基因的作用

和功能,将从欧李成熟果实中分离的ChPSYcDNA序列,连接到原核表达载体pET-

28a(+),导入大肠杆菌BL21(DE3)体内诱导表达.SDS分析表明,1.0mmol/L

IPTG诱导4h,表达了相对分子量约为45.8kD融合蛋白产物；IPTG的浓度和诱导

时间优化表明,1.2mmol/LIPTG诱导6h时,融合蛋白的表达量最大.此

外,Western-blot试验证实,表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应.

这为欧李八氢番茄红素合成酶基因ChPSY生物学功能的深入研究奠定了基础.%To

understandtheroleandfunctionoftheCerasushumilisphytoene

synthasegene(ChPSY),thefull-lengthcodingregionofChPSYcDNAfrom

theCerasushumilismaturefruitwaslinkedintotheprokaryoticexpression

vectorpET?8a(+).TherecombinantplasmidpET-ChPSYwastransformed

intoE.coliBL21(DE3)forinducedexpression.TheanalysisofSDS

demonstratedthatthefusionprotein(6xHis-PSY)wasproducedat4h

afterinductionby1.0mmol/LIPTGandmigratedatasizeofabout45.8kD.

TheoptimizationofIPTGconcentrationandinductiontimeshowedthe

fusionproteinquantitywasmaximalafter6hinductionby1.2mmol/L

IPTG.TheresultsofWestern梑lotdemonstratedthatthefusionprotein(6

XHis-PSY)couldberecognizedbyanti-6xHismonoclonalantibody.The

researchprovidedabasisforfurtherstudyonthebiologicalfunctionof

ChPSYgeneinfruitcarotenoidbiosynthesisofCerasushumilis(Bge)Sok.

【期刊名称】《山西农业科学》

【年(卷),期】2012(040)012

【总页数】5页(P1235-1239)

【关键词】欧李;八氢番茄红素合成酶;cDNA序列;原核表达

【作者】陈俊奇;王鹏飞;杜俊杰;李润丰;洪文泓;李佩;马精选;张建成

【作者单位】山西农业大学园艺学院,山西太谷030801;山西农业大学园艺学院,山

西太谷030801;山西农业大学园艺学院,山西太谷030801;山西农业大学园艺学院,

山西太谷030801;山西农业大学园艺学院,山西太谷030801;山西农业大学园艺学

院,山西太谷030801;山西农业大学园艺学院,山西太谷030801;山西农业大学园

艺学院,山西太谷030801

【正文语种】中文

【中图分类】S662.3

类胡萝卜素是自然界中分布最为广泛的一大类色素，不仅赋予植物花、果实等器官

鲜艳的色彩，还在光合作用、ABA和芳香物质合成中起重要作用[1-2]。八氢番茄

红素合成酶（Phytoenesynthase，PSY）是类胡萝卜素生物合成途径中的第1个

限速酶，它催化2个分子GGPP（牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸）聚合形成八氢番茄

红素，其编码基因已成为人们应用基因工程技术调控植物类胡萝卜素的生物合成，

改善果树、蔬菜和花卉等园艺植物观赏性能、营养品质和经济价值的首选靶基因[1，