微生物学检验技术 课件 10项目十：细菌接种技术.pptx

项目十

细菌接种技术

学习目标

项目十细菌接种技术

1、掌握分区划线细菌接种技术、连续划线接种技术的目的、方法。

2、掌握斜面接种技术、穿刺接种技术的目的、方法。

3、了解液体培养基接种技术、倾注平板法的目的、方法。

思维导图

项目十细菌接种技术

一、细菌的接种工具

项目十细菌接种技术

一、细菌的接种工具

（一）接种环与接种针

接种环与接种针是微生物检验中用来取菌、接种和分离细菌的器具，接种环是用来划线、纯菌转种、分离培养和挑取菌落及菌液、制备细菌涂片等。接种针主要用于挑取单个菌落、穿刺接种及斜面接种细菌等。

一、细菌的接种工具

（二）红外线接种环灭菌器

红外接种环灭菌器是采用红外线热能进行灭菌的微生物检验仪器。使用方便，操作简单，无明火，不怕风，使用安全。可广泛用于厌氧培养箱、生物安全柜及运动的车辆等环境中进行微生物实验。

二、细菌接种方法

项目十细菌接种技术

（一）、分区划线接种技术

概述

分区划线接种技术是指把混杂在一起的不同种类的细菌或同一细菌群体中的不同细胞用接种环在固体琼脂胚芽及表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离细菌的纯种。由于这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才可得到纯种。此种方法多用于含细菌量较多的临床标本，如脓汁、粪便等。

（一）、分区划线接种技术

方法

右手持接种环，先将接种环灭菌，待冷却后从待分离标本中挑取少量标本，左手持琼脂平板，将接种环深入皿内，先在培养基一角涂成直径约1cm大小的薄膜，并以此为起点在琼脂表面接续不重叠划线作为第一区；然后烧灼接种环，转动平皿至合适操作的位置，将接种环通过第一区3~4次，连续划线，线与线之间不要重叠作为第二区，，依次画第3、4、5。平板上每一区的细菌数会逐渐减少，直至分离出单个菌落。这里需要注意的是除了最后一区，其余各区划线面积不得超过平板面积的1/4。

（一）、分区划线接种技术

方法

各区之间交叉3~4次，各区间交角大约为120⁰，画完第一区，第二、三、四区接种环需要灭菌。经过18~24h培养，第四区出现了很多单菌落，即为细菌的“纯种”

（一）、分区划线接种技术

方法

（二）、连续划线接种技术

概述

连续划线也是细菌分离纯化的一种方法，将含有多种细菌的临床标本和固体培养物，经过连续划线接种到固体培养基表面，由于划线的分散作用，使原来混杂在一起的细菌细胞在培养基表面分开呈单个菌，经18~24h培养后就得到单个菌落。此法适用于含细菌量不多的标本或棉拭子、咽拭子。

（二）、连续划线接种技术

方法

将标本或棉拭子、咽拭子等直接涂布于培养基的1/5处，然后以此为起点开始用接种环或棉拭子、咽拭子在平板表面连续不重叠划线并逐渐下移，直至划满整个琼脂平板表面。

（二）、连续划线接种技术

方法

（三）、斜面接种技术

概述

斜面接种技术主要用于保存菌种或细菌纯种增菌，也可以用于某些生化反应鉴定试验，如枸橼酸盐、尿素和克氏双糖铁培养基的接种。但由于目的不同，接种的方法也略有差异。

（三）、斜面接种技术

方法

用于保存菌种或细菌纯培养的斜面接种法是将接种环（接种针）烧灼灭菌，挑取单个菌落从培养基底部向上划一条直线，再从底部开始向上连续不重叠划曲线接种，线条尽可能的密且均匀；或者直接自下而上划曲线接种。用于生化反应鉴定的高层斜面培养基接种方法是用接种针挑取待鉴定细菌的菌落，一般挑取菌落的顶端，先用接种针插入斜面正中垂直刺入底部，抽出后在斜面上由下至上划曲线接种。

斜面接种法

（三）、斜面接种技术

方法

高层斜面接种法

（四）、穿刺接种技术

概述

穿刺接种技术是用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中。穿刺接种法多用于半固体培养基或克氏双糖铁、明胶等具有高层的培养基接种。其中，半固体培养基的穿刺接种可用于观察细菌的动力。

（四）、穿刺接种技术

方法

接种时用接种针挑取细菌菌落，由培养基中央垂直刺入，至距管底约0.4cm处，在沿穿刺线退出接种针；克氏双糖铁、明胶等有高层斜面之分的培养基，先穿刺高层部分，退出接种针后直接划线接种斜面部分。

（五）、液体培养基接种技术

概述

液体培养基接种技术是由斜面菌种接种到液体培养基中的方法。此种方法多用于各种液体培养基，例如肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等的接种。

（五）、液体培养基接种技术

方法

用接种环挑取单个菌落，倾斜液体培养管，在液面与管壁交界处研磨接种物（以试管直立后液体淹没接种物为准）