普通菜豆抗普通细菌性疫病田间鉴定技术规范.docxVIP

1

DB14/T1367—2017

普通菜豆抗普通细菌性疫病田间鉴定技术规范

1范围

本标准规定了普通菜豆抗普通细菌性疫病田间鉴定的术语和定义、接种体制备、田间抗性鉴定、病情调查、抗性评价、接种鉴定后材料处理、鉴定记载表。

本标准适用于普通菜豆对普通细菌性疫病的田间抗性鉴定及评价。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是比不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T2060.1辣椒抗病性鉴定技术规程第1部分：辣椒抗疫病鉴定技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

普通菜豆

豆科（Leguminosae），蝶形花亚科（Papilionoideae），菜豆族（Phaseoleae），菜豆属（Phaseolus）中的一个栽培种，一年生草本植物，学名PhaseolusvulgarisL.。英文名为Commonbean。染色体2n=22。

3.2

菜豆普通细菌性疫病

由地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种（Xanthomonasaxonopodispv.phaseoli）引起的以叶部形成有亮柠檬黄色边缘包围的不规则病斑，病斑合并导致大面积组织损伤，使叶片坏死、脱落，病株呈灼烧状为主的菜豆细菌性病害。该病害在菜豆的整个生育期内均可发生，病菌可侵染叶片、茎蔓、豆荚及种子等产生不同病症。病原菌的生物学特性情况见附录A。

3.3

抗病性田间鉴定

将一定浓度病原菌悬浮液直接接种到田间植株的叶片、果实、茎秆及根等部位，依据植株的发病情况进行抗病性鉴定。

4接种体制备

4.1病原物的分离、纯化及保存

2

DB14/T1367—2017

采集具有典型病斑的菜豆叶片或病荚，采用常规组织分离方法在牛奶吐温选择性培养基（成分及制备见附录B）上分离病原物。分离物经菌落形态鉴定确认为地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种后，进行分离物纯化，经致病性测定后，在4℃低温下保存备用。

4.2接种体

选用地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种作为抗病性田间鉴定的接种体。

4.3接种体的繁殖和保存

4.3.1繁殖

将纯化的菌株于牛肉膏蛋白胨液体培养基（成分及制备见附录C）中，在28℃、200r/min条件下振荡培养48h，用灭菌蒸馏水稀释至菌液浓度为1×108cfu/mL，接种悬浮液用于田间接种。

4.3.2保存

挑取病原菌的单菌落接种于装有1mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的菌种保藏管中，在28℃、200r/min条件下振荡培养过夜。离心后，加入50%灭菌甘油，在-80℃低温下保存备用。

5田间抗性鉴定

5.1鉴定圃选择

鉴定圃选择在普通细菌性疫病常发区，该区排灌方便、土地平整、肥力水平中等以上。

5.2鉴定圃设计

适期播种，鉴定材料随机或顺序排列，3次重复；每份材料播种5m2，行长5.0m，行宽0.5m，每行留苗35株，株距约0.15m。鉴定圃周围设保护行或保护区。

5.3鉴定对照品种

每10～15份鉴定材料设1组已知抗病、感病对照材料。抗病对照品种为“洋菜豆（F0001292）”，感病对照品种为“黑金豆（F0001585）”。

5.4接种时期

植株生长到第1片三出复叶至开花期前期均可接种。

5.5接种方法

人工接种鉴定采用喷雾接种法。用喷雾器对叶片上、下表面均匀喷雾，接种至整个植株完全湿润。

5.6接种后管理

接种后田间应充分灌溉，保证病菌的入侵、扩展。接种前后避免施用任何药剂。

6病情调查

6.1调查时间

3

DB14/T1367—2017

病情调查于接种后20d进行。

6.2调查取样

每个重复中的每份鉴定材料棋盘式取样，田块均匀划成8个小区，均匀间隔取4个小区，每区随机取5株，共调查20株。

6.3调查部位

植株叶片和荚的外部症状。

6.4病情级别划分

接种植株病情分级及其相对应的症状描述见表1。

表1病情级别划分

病情级别

症状描述

0

没有可见症状。

1

局部可见轻微水渍状病斑；荚上没有病斑。

3

有少量小病斑，发病面积约占整叶的2%；一般荚上没有病斑。

5

小病斑开始合并，有的被黄色晕圈包围，轻微枯萎，发病面积约占整叶的5%；荚上病斑小，不合并。

7

中等和大病斑被黄色晕圈和坏死组织包围，发病面积约占整叶的10%；荚上病斑大，合并，常常有菌脓产生。

9

大病斑合并坏死，发病面积约占整叶的25%以上，导致叶片脱落；荚上病斑合并扩展，产生大量菌脓，有的导致荚变形或空荚。

6.5调查及计算

根据病害症状描述，调查每份鉴定材料接种单株的发病情况，确定病情