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CSRP1蛋白在大肠癌中的表达及意义

石宇;王宇博;谢风;何成彦;师庆红

【摘要】目的研究CSRP1(cysteineandglycinerichprotein1)蛋白在大肠癌组

织中的表达情况,并探究其临床意义.方法CSRP1蛋白的差异表达情况应用色谱及

质谱联用技术分析筛选,初筛实验的准确性验证选用免疫印迹试验.结果分析质谱鉴

定相关结果显示,CSRP1蛋白在大肠癌组织中的表达明显低于其在正常组织中的表

达,免疫印迹试验结果与质谱分析结果吻合,确保了其准确性.结论CSRP1蛋白在大

肠癌组织中下调表达,其表达情况与肿瘤的发展、调节有密切的关系.

【期刊名称】《中国实验诊断学》

【年(卷),期】2018(022)012

【总页数】3页(P2043-2045)

【关键词】CSRP1;大肠癌;免疫印迹技术;液质联用技术

【作者】石宇;王宇博;谢风;何成彦;师庆红

【作者单位】吉林大学中日联谊医院检验科,吉林长春130033;吉林大学中日联谊

医院检验科,吉林长春130033;吉林大学中日联谊医院检验科,吉林长春130033;

吉林大学中日联谊医院检验科,吉林长春130033;吉林大学中日联谊医院检验科,

吉林长春130033

【正文语种】中文

【中图分类】R735.3

富含半胱氨酸和甘氨酸的蛋白质(CSRP)家族是一组由两个串联排列的LIM结构域

与短的富含甘氨酸的区域相连的蛋白质[1]。到目前为止，CSRP家族中的三个成

员(CSRP1，CSRP2和CSRP3)已被证实在脊椎动物中表征，并且展示了具有独特

双重亚细胞定位的组织特异性分布。其中，CSRP1已经在富含平滑肌的各种器官

中检测到高表达[2]。本研究旨在探讨CSRP1在大肠癌及癌旁组织中的表达情况，

研究其差异，探究其与肿瘤发生、发展之间的关系，为临床诊断提供依据。

1材料与方法

1.1研究对象

遴选吉林大学中日联谊医院近两年内已确诊大肠癌患者17例，取新鲜癌组织及距

其边缘10cm以上的癌旁正常组织标本，取材后立即液氮速冻，-80℃保存备用。

1.2试剂与仪器

于GE公司(美)购入DTT、SDS、TMED、SDS，于西格玛公司(美)购入RNA酶、

DNA酶、尿素，于Beyo-time公司购入PMSF、考马斯亮蓝-G250，于Bio-Rad

公司购入蛋白质定量试剂盒，于赛摩-菲舍尔公司购入LTQXL离子肼质谱仪。

1.3方法

1．3．1提取样本总蛋白，检测其浓度打开低温冰箱取出样本，将80mg样本组

织与液氮混合，研磨充分，至其全部粉碎成匀浆。将研磨后样本以12000g离心

1h(温度控制在4℃左右)，取离心后上清液体备用。考马斯亮蓝染色后，在595

nm下检测吸光度，确定蛋白浓度。检测结束后，将液体分装，放入-80℃冰箱保

存备用。

1．3．2水解样本蛋白，制备多肽混合物于低温冰箱中取出样本，于室温静置，

待其温度平衡后，应用NH4HCO3稀释上述样本以达到降低尿素浓度的目的。加

入适量DTT，充分混匀，确保其最终浓度在20mmol/L。将制备好的样本放于

56℃避光保存1h。完成上述操作后，将反应温度调整至室温，应用适量IAA调

整最终浓度至50mmol/L，于避光处静置30min。加入1∶50固定比例的胰酶：

蛋白，37℃水浴过夜。将酶切产物置于-80℃保存。

1．3．3应用液质联用技术鉴定分析多肽混合物将样品溶解于BufferA，每次取

出50μg上样分析，将制得的多肽放入LTQXL质谱仪中进行分析，挑选恰当的

核质比检测区间，应用数据依赖方式进行质谱扫描。得到的质谱图用Bio-

works3.3.1SP1软件的SEQUEST算法分析处理，用Uniprot-sprot数据库查询，

对差异蛋白进行比较。

1．3．4WesternBlot分析将CSRP1作为目标蛋白，应用免疫印迹试验验证，

确定CSRP1蛋白在大肠癌组织和癌旁正常组织中的表达情况。试验应用ABGENT

公司(美)采购的CSRP1单克隆抗体，内参为β-actin。

1.4统计学处理

应用SPSS24.0软件对试验结果进行分析处理，处理依据为SEQUEST