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血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书（ELISA）

原理

在微孔条上预包被丙型肝炎病毒（HCV）重组嵌合抗原，

采用ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体。样品加入已有

样品稀释液的包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，

若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原

抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的第二，最

终形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤除去未结合

的游离酶，加入显色剂后显色。

标本采集

2.1采集前病人准备：受检者应空腹

2.2标本种类：血清或血浆

2.3标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超

过4小时，分离血清备用。

标本储存：2-8°C保存不应超过1周，-20°C不应超

过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。

标本运输：密封，室温运输。

标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血

标本不宜作此项检测。

试剂

6.1试剂名称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒

6.2试剂生产厂家：河南华美生物工程有限公司。

6.3包装规格：96Test/Kit

6.4试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记

抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，

底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。

6.5试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效

期6个月。

仪器设备

7.1仪器名称：自动酶标仪

7.2仪器厂家：KHB

7.3仪器型号：ST360

操作步骤

8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温

（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应

充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19

稀释后使用。

8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。

8.4加样品稀释液：用加样器在微孔反应条板孔中加

入样品稀释液，每孔100l，空下四孔准备加对照。

8.5加标本和留空白：将每份待检标本各10l分别

加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作

空白对照，标好位置。

8.6加对照：在预先空下的四孔中用加样器分别加入

阴性对照一孔，阳性对照三孔，每孔100l，标好位

置。对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准

确性。

8.7温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温

育30分钟。

8.8洗涤（一）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干

（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。

8.9加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体100l，轻

拍混匀。

8.10温育（二）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温

育30分钟。

8.11洗涤（二）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣

干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。

8.12显色：每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，

置37℃暗处20分钟。

8.13终止：每孔加终止液50l，混匀。

8.14测定：用酶标仪单波长450nm或双波长

450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白

对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。

结果判断与分析

9.1临界值（C.O.）的计算：临界值＝0.05＋0.08×

阳性对照孔OD值，阴性对照OD均值大于0.1时应重

新试验，小于0.05时以0.05计算。三孔阳性对照OD

平均值大于阴性对照0.6以上，方可认为试剂盒有效；

若一孔阳性对照OD值与三孔阳性对照OD平均值差异

大于30%，该孔应舍弃，并用另两孔重新计算OD平均

值。

9.2结果判定：样品OD值S/C.O=1者为阳性

样品OD值S/C.O1者为阴性

10.质量控制：每次用含2NCU/mlHCV抗体的质控血

清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控

制范围内。

11.参考范围：阴性

12.临床意义：在血清中抗HCV抗体阳性表明有急性

或慢性HCV感染