DB34T 3283-2018 副猪嗜血杆菌的分子分型MLST方法.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T3283—2018

副猪嗜血杆菌的分子分型MLST方法

MultilocussequencetypingdetectionmethodforHaemophilusparasuis

2018-12-29发布2019-01-29实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T3283—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽农业大学提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、安徽省动物卫生监督所、阜阳市动物卫

生监督所、合肥市动物疫病预防与控制中心、安徽省兽药饲料监察所、同济大学。

本标准主要起草人：李郁、陈章、李雪松、张利亚、黄晓慧、刘晓露、孙裴、汪清峰、张劲松、高

亚飞、孟天恺。

I

DB34/T3283—2018

副猪嗜血杆菌的分子分型MLST方法

1范围

本标准规定了副猪嗜血杆菌的分子分型MLST的术语和定义、试剂和材料、仪器和设备、操作步骤、

生物安全及防污染措施。

本标准适用于副猪嗜血杆菌的分子分型检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

NY/T2417副猪嗜血杆菌PCR检测方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

管家基因house-keepinggenes

所有细胞中均要表达的一类基因，其产物是维持细胞生命活动所必需的，其基因序列高度保守并且

在大多数情况下持续表达。

4试剂和材料

除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯；实验用水符合GB/T6682中一级水的要求。所有

试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

4.1细菌基因组DNA提取试剂盒。

4.2普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。

4.3TaqDNA酶。

4.4dNTP：dATP、dTTP、dCTP、dGTP。

4.5引物：扩增引物和测序引物序列见附录A表A.2。

4.610×PCR缓冲液：200mmoI/LTris-HCl（pH8.4），200mmol/L氯化钾，15mmol/L氯化镁。

4.7琼脂糖凝胶。

4.8Gelred核酸染色剂。

4.96×溴酚蓝上样缓冲液。

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DB34/T3283—2018

4.10分子量标记：1000bpDNAmarker。

4.115×TBE电泳缓冲液：445mmoI/LTris，445mmol/L硼酸，10mmol/LEDTA(pH8.0）。使用时

稀释为0.5×TBE电泳缓冲液。

4.12质控菌株：副猪嗜血杆菌。

5仪器和设备

5.1离心机：最大转速14000r/min以上。

5.2天平：量程2kg，感量0.1g。

5.3p