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干扰素检测的意义及方

法比较

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干扰素检测的意义及检测方法比较

生计一班学号：1117涂一帆

摘要：干扰素（interferon,IFN)是1957年发现的细胞因子，最初发现某一种病毒感染的细

胞能产生一种物质可干扰另一种病毒的感染和复制，因此而得名。根据干扰素产生的来源和结

构不同，可分为IFN-α、IFN-β和IFN-γ，他们分别由白细胞、成纤维细胞和活化T细胞所产

生。各种不同的IFN生物学活性基本相同，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。这里主要

利用生物分析法和免疫分析法进行检测。

关键词：干扰素生物分析法免疫分析法

正文：

细胞因子是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质，具有

调节和血细胞生成、细胞生长以及损伤组织修复等多种功能。细胞因子可被分为白细胞介素、

干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子等。众多细胞因子在体内

通过旁分泌、自分泌或内分泌等方式发挥作用，具有多效性、重叠性、拮抗性、协同性等多种

生理特性，形成了十分复杂的细胞因子调节网络，参与人体多种重要的生理功能。所以细胞因

子检测是判断机体免疫功能的一个重要指标，对于疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞

因子治疗监测等都有重要意义。

生物分析法有两种：

1.依赖性细胞株：利用一些肿瘤细胞株必须依赖于细胞因子方能在体外增殖的特性进行检

测，但是干扰素的测定利用此法并不简便，所以不当采用。

2.功能检测：利用一些细胞因子的功能特性，可建立相应的活性测定方法。在这里可以利用

干扰素的抑制病毒感染效应，对已进行病毒感染的细胞群加入干扰素的特征进行观察，达到检

测的目的。

免疫分析法：

1.流式细胞仪检测:

原理：利用Brefeldin(BFA)、Monensin阻断了胞内高尔基体介导的转运方法，使得细胞因子聚

集、蓄积，增强细胞因子信号，可被流式细胞仪检测。

方法：用抗细胞因子（干扰素）抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志组合，即可检测不同细胞

亚群细胞因子的分泌，同时采用特殊的化学与抗体选择，确保静止与无细胞因子分泌细胞的最

小荧光背景。

所需材料：蛋白转运抑制剂：阻断高尔基体介导的转运作用，使得刺激细胞表达的细胞因子聚

集在胞浆内质网内，以利于准确检测细胞产生细胞因子的能力。

2.酶联免疫吸附实验（ELISA）

①间接ELISA（IndirectELISA）：用于筛检抗体（抗特定抗原成分的特异性抗体）。此法是测定

抗体最常用的方法。

②夹心ELISA（SandwichELISA）：用于检测目的抗原的量。其优点是避免了对特异性抗体的直

接标记，但增加了操作步骤和测定时间。

③竞争ELISA（CompetitiveELISA）用于确定抗原特异性或待检标本中含交叉反应成分时为了提

高实验的特异性而使用的一种方法。根据标记抗原与同种未标记待测抗原与抗体间发生竞争性

结合的原理，主要用于测定小分子抗原。

检测方法的进展：高通量细胞因子检测

CBA(CytometricBeadArray)是一种微珠多用途检测分析技术，它由一系列的微珠组合来捕获并

结合流式细胞仪技术检测细胞培养液、EDTA血浆、血清样本中被检测物质的量。其采用夹心

法分析策略，与传统的ELISA分析技术相比，此方法可以同时检测多项指标。用已知的标准品

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和对照标准曲线就可以得出被测样本的浓度。此分析方法不受样本量的限制，而且可以得到一

个样本的多个数据。

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原理：细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后，

被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。底物孵

育后，PVDF孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过显微镜或ELISPOT酶联

斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。

方法比较：

生物学检测法与免疫学检测法的比较：

生物学检测法比较敏感，又可直接测定生物学功能，是最可靠的方法，适用于各种实验目的，

是科研部门最常用的技术，但需要长期培养依赖性细胞株，检测耗时长，步骤繁杂，影响因素

多，不容易熟练掌握。

免疫学检测法比较简单，迅速，重复性好，但所测定的只代表相应细胞因子的量而不代表活

性，同时敏感度也低于生物活性检测法（约低10～100