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血管紧张素转化酶底物的制备及对肺癌诊断的临床意义

周海燕;姚莉韵;李盈懿;张建华

【摘要】目的建立血管紧张素转化酶(ACE)底物的合成方法,探讨血清ACE活性的

测定方法.方法底物制备采用N-羟基琥珀酰亚胺活化酯合成多肽法;建立分光光度

法测定ACE的活性.结果底物呋喃丙烯酰苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸纯度为99.5%.底

物的米氏常数K_m为0.25mmoL/L,血清ACE活性正常参考值范围46.7-113.3

U/L,标本批内和批间平均变异系数分别为3.9%和4.9%.临床检测表明,肺鳞癌、肺

腺癌患者血清ACE活性显著下降(P0.05);而肺小细胞癌患者ACE活性没有明显

降低(P0.05).结论所合成的底物适用于临床诊断各类肺癌的要求.

【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》

【年(卷),期】2010(030)002

【总页数】4页(P240-243)

【关键词】血管紧张素转化酶;呋喃丙烯酰苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸;肺癌

【作者】周海燕;姚莉韵;李盈懿;张建华

【作者单位】上海交通大学,胸科医院检验科,上海,200025;上海交通大学,基础医学

院化学教研室,上海,200025;上海交通大学,医学院辅导员办公室,上海,200025;上海

交通大学,基础医学院化学教研室,上海,200025

【正文语种】中文

【中图分类】R734.2

血管紧张素转化酶(angiotensinconvertingenzyme，ACE)，又名为激肽酶Ⅱ，

广泛分布于全身各组织内皮或上皮细胞，其中肺毛细血管内皮细胞是血中ACE的

主要来源。ACE是肾素—血管紧张素—醛固酮及缓激肽系统的重要调节因素[1]。

1975年Lieberman等[2]首次报道了肺结节病患者血清ACE活性升高，近年来肺

部疾病患者血液中ACE的活性变化一直受到关注。研究[3-4]发现，病毒性肝炎和

肝硬化患者血清中ACE活性均明显升高，而慢性阻塞性肺部疾病，如呼吸窘迫综

合征和肺癌等患者ACE活性明显降低。因此，血清ACE活性测定在临床上日益受

到重视。

测定血清ACE的方法有生物法、动力学法、放射性核素法、荧光法和高效液相色

谱法[5-7]等，然而这些方法有的要用有机溶剂提取,有的需要衍生化,有的需去除血

清蛋白，均因操作繁琐而不适于医院常规应用。文献[8-9]报道，酶法测定ACE活

性具有灵敏、快速、重复性好等优点，而呋喃丙烯酰苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸

(furanacryloylphenylalanylglycylglycine，FAPGG)是测定ACE活性的理想底

物。

本研究设计、优化了FAPGG的合成方法，所用原料成本较低且反应操作简便。建

立了分光光度计连续检测法来检测血清ACE活性，灵敏度更高，此法可用于临床

全自动生化仪的动力学检测。

1材料与方法

1.1试剂和仪器呋喃丙烯酸(FA)、苯丙氨酸(Phe)、N-羟基琥珀酰亚胺(N-HOSu)、

甘氨酰甘氨酸(Gly-gly)(吉尔生化上海有限公司)；N，N’-二环已基碳酰亚胺

(DCC)(国药集团化学试剂有限公司)；所用试剂及溶剂均为分析纯。数字熔点仪

WRS-1A(上海物理光学仪器厂)；紫外可见分光光度仪UV-2100(尤尼柯上海仪器

有限公司)。

1.2样本所有样本来源于上海交通大学附属胸科医院。体检健康者90例，其中男

性48例，女性42例，年龄18～70岁；肺鳞癌患者25例，其中男性15例，女

性10例，年龄35～75岁；肺腺癌患者15例，其中男性10例，女性5例，年龄

30～65岁；肺小细胞癌患者15例，其中男性8例，女性7例，年龄40～81岁。

1.3ACE底物FAPGG的合成

1.3.1呋喃丙烯酸活化酯(FA-N-HOSu)的合成：FA(30mmol)和N-HOSu(30

mmol)置于500mL圆底烧瓶中，加入DCC(30mmol)和二氧六环200mL，4℃

搅拌反应过夜。过滤，所得粗品用异丙醇重结晶，得淡黄色固体，产率50%，熔

点：119～120℃。薄层层析(TLC)检查为单点(正己烷∶乙酸乙酯=7∶3)。

1.3.2呋喃丙烯酰苯丙氨酸(FA-phe)的合成：FA-N-HOSu(30mmol)