抗癌活性肽对胆囊癌GBC-SD细胞作用前后的基因表达谱研究 .pdfVIP

抗癌活性肽对胆囊癌ＧＢＣ－ＳＤ

细胞作用前后的基因表达谱研究

【摘要】目的研究抗癌活性肽对人胆

囊癌细胞系GBC-SD细胞作用前后的基因表

达谱，筛选与抗癌活性肽作用相关的基因表

达改变。方法将1152条人类全长基因的PCR

产物按微矩阵排列点样于特殊处理的玻片

上制备成表达谱芯片；按一步法抽提抗癌活

性肽作用前后体外培养的胆囊癌细胞的RNA

并纯化mRNA，通过逆转录用两种荧光

Cy3-dUTP和Cy5-dUTP标记对照和实验组胆

囊癌细胞cDNA，制成cDNA探针并与表达谱

芯片杂交，用ScanArray4000扫描仪扫描芯

片上两种荧光信号，计算机分析判定差异表

达的基因。结果在1152条基因中筛选出有

差异表达的基因245条，其中上调的121条，

下调的124条。结论利用本基因表达谱芯

片可同时研究数以千计的基因表达水平，从

而在基因水平上探讨抗癌活性肽对胆囊癌

GBC-SD细胞作用的机制。

【关键词】抗癌活性肽；胆囊癌；细

胞系；基因芯片；基因表达谱

【Abstract】ObjectiveTo

investigategeneexpressionpatternof

humangallbladdercarcinomacellline

treatedbyanti-cancerbioactive

peptide(ACBP)，andinthe

identificationofnovelcance

rassociatedThecDNA

retro-transcribedfromequalquantity

mRNAfromthegallbladdercarcinomacell

line(GBC-SD)whichwerelabeledwith

Cy5andCy3fluorescenceasamixed

probewashybridizedwithcDNA

microarraywhichrepresentingasetof

1152humanwasscannedbylaser

acquiredimagewasanalyzedby245

differentiallyexpressedgeneswere

identifiedthatfurtheridentified121

upregulatedand124downregulatedcDNA

microarrayforanalysisofgene

expressionpatternsisapowerfulmethod

toidentifynovecancerassociated

genes.

【Keywords】Anti-cancerbioactive

peptide(ACBP)；Gallbladdercarcinoma；

Cellline；Genechip；Geneexpression

pattern

本研究将通过基因芯片技术比较分析

抗癌活性肽对胆囊癌GBC-SD细胞的基因表

达谱的影响，了解作用前后基因表达的变化，

深入探讨这种新型生物活性制剂的分子机

制，为肿瘤治疗提供新方法。

1材料与方法

细胞株人胆囊癌GBC-SD细胞由山东大

学齐鲁医院肿瘤研究所保存并提供。

主要试剂与耗材

细胞培养相关试剂

细胞总RNA提取、分析试剂

基因芯片标记、杂交试剂盒上海博星

(BioStar)基因芯片有限责任公司。

实验方法

细胞培养与药物作用胆囊癌细胞按适

当密度接种于培养瓶内常规培养，当达到80%

融合时，加入活性肽使终浓度达到8mg/ml

继续培养48h开始有形态的改变时终止。

探针制备用改进的Trizol试剂一步法

抽提培养细胞总RNA。

芯片杂交洗涤按杂交试剂盒说明操作。

检测与分析用ScanArray4000扫描仪

扫描芯片，用Gene