KLF4_在肾透明细胞癌侵袭和迁移中的作用及其与SKA1_的靶向调控关系探讨.pdfVIP

山东医药2023年第63卷第14期

·论著·

KLF4在肾透明细胞癌侵袭和迁移中的作用

及其与SKA1的靶向调控关系探讨

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张萌萌，刘盟雪，袁帅，韩静

1新疆医科大学附属肿瘤医院药物临床试验机构办公室，乌鲁木齐830011；

2新疆医科大学附属肿瘤医院泌尿外科

摘要：目的探讨肾透明细胞癌（ccRCC）组织中锌指转录调节因子4（KLF4）的表达变化，及其调控纺锤体和动

粒相关复合体亚基1（SKA1）促进ccRCC细胞侵袭、迁移的作用。方法从癌症和肿瘤基因图谱（TCGA）数据库下载

440例ccRCC原位癌组织和80例伴有远处转移的ccRCC组织的转录组测序数据，分析KLF4在原位癌组织和伴有远

处转移癌组织中的表达差异。取人肾癌细胞786-O、ACHN，分为KLF4过表达组、空载体组、共表达KLF4/SKA1组，

采用慢病毒载体技术，分别转染pCMV-KLF4、pCMV、pCMV-KLF4和pCMV-SKA1质粒；采用Transwell小室实验观察

各组细胞侵袭和迁移能力，Westernblotting法检测细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表

达。取786-0、ACHN细胞，分为KLF4干扰组及干扰对照组、KLF4过表达组及空载体组，KLF4干扰组和干扰对照组

分别转染siKLF4和siNC，KLF4过表达组和空载体组分别转染pCMV-KLF4、pCMV质粒；采用实时荧光定量PCR法

检测细胞SKA1mRNA表达，Westernblotting法检测细胞SKA1蛋白表达；利用Jaspar和ConTraV3在线工具分析预

测KLF4在SKA1启动子区的结合位点，并采用双荧光素酶报告实验进行验证。结果KLF4在伴有远处转移的

ccRCC组织中的表达低于ccRCC原位癌组织（P0.01）。在786-O和ACHN细胞中，与空载体组相比，过表达KLF4

组细胞侵袭和迁移能力降低（P均0.01）；与过表达KLF4组比较，共表达KLF4/SKA1组细胞侵袭和迁移能力增加

（P均0.01）。与空载体组相比，过表达KLF4组E-cadherin蛋白表达水平升高、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平

降低；与过表达KLF4组比较，共表达KLF4/SKA1组E-cadherin蛋白表达水平降低、N-cadherin和Vimentin蛋白表达

水平升高（P均0.05）。与siNC组相比，siKLF4组SKA1mRNA及蛋白表达水平均升高；与pCMV空载体组相比，

pKLF4过表达组SKA1mRNA及蛋白表达水平均下降（P均0.01）。SKA1转录起始位点上游850～900bp启动子序

列中存在KLF4的结合位点。双荧光素酶报告实验结果显示，与pSKA1-MUT+pKLF4/pCMV、pSKA1-WT+pCMV组

比较，pSKA1-WT+pKLF4组荧光素酶活性降低（P均0.01）。结论KLF4表达下调与ccRCC恶性进展相关，KLF4

可通过结合SKA1启动子区特定序列负向调控SKA1表达，从而抑制ccRCC细胞的侵袭和迁移。

关键词：锌指转录调节因子4；纺锤体和动粒相关复合体亚基1；细胞侵袭；细胞迁移；

肾透明细胞癌

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.14.001

中图分类号：R737.11文献标志码：A文章编号：1002-266X（2023）14-0001-06开放科学（资源服务）

标识码（OSID）

RoleofKLF4ininvasi