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实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）

一、实验目的与要求

1了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。

2掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和

现代生化检测试剂盒的应用。

二、实验原理

尿素在脲酶作用下分解生成氨。在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁

氰化钠催化生成蓝色的靛酶。其反应式为：CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲

酸O-2NH3+CO2

氨

NH3+OCl-NH2Cl+OH-

次氯酸氨胺催化剂

NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2

苯酚P胺基苯酚

HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O

酚靛三、实验仪器与试剂

1仪器

（1）AT648半自动生化分析仪1台；

（2）4孔恒温水浴锅1个；

（3）振动摇床1台。

2分组及仪器2人一组，每组仪器包括：

（1）试管架1个；

（2）2ml试管10个；

（3）20μl微量加样器1个；

（4）1ml移液管1个；

（5）5ml移液管2个；

（6）吸耳球1个；

（7）搪瓷盘1个；

（8）微量加样滴头；

（9）吸水纸。

3本试剂盒内含5种试剂：

（1）脲酶（冻干）2瓶

（2）pH8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成1×46ml

（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成1×225ml

（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成1×225ml

（5）尿素氮标准液（20mg/dl）2×2ml

四、实验步骤

1血清

（1）取脲酶一瓶，用23.0mlpH8.0缓冲液溶解。

（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。表131系列反应管中所加溶液的量

空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5

（3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。

（4）再于37℃水浴中保温20min，取出冷却至室温，于721分光光度计/AT648半自动生

化分析仪上550nm波长下比色。以空白管校正“0”点、读取各管的光密度。

2尿液用无氨水将尿液稀释20倍，再按上法测定。

五、实验结果与分析

尿素氮含量（mg/dl）=测定管吸光度标准管吸光度×稀释倍数×20mg/dl线性范围：血清

中尿素氮含量为100mg/dl或尿液中尿素氮含量为2000mg/dl以内，用本试剂盒测得的结果

线性良好。

六、实验报告

参照《营养学》、《生物化学》原理分析。

七、注意事项

1试剂为空白对照；

2每组样品做2～3个平行实验；

3正常参考值：正常人血清尿素氮含量为5～17mg/dl；尿素氮标准液

20mg/dl=7.14mmol/L。