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原核表达系统的工作原理

原核表达系统是指利用原核生物（如大肠杆菌等）来表达外源蛋白质的工具，在生物

技术和基因工程领域应用十分广泛。原核表达系统通过重组DNA技术将目标基因插入原核

细胞的表达载体中，并利用细胞自身的代谢机制，将目标蛋白质大量表达出来。本文将详

细介绍原核表达系统的工作原理。

1.原核表达系统的基本构成

原核表达系统的基本构成包括表达载体和宿主细胞两部分。

表达载体是一种重组DNA分子，通常包括以下基本组成成分：

（1）起始位点（起始密码子）：在大肠杆菌中通常为AUG。

（2）表达基因：包括编码目标蛋白质的DNA序列和转录启动子、转录终止子等序列。

（3）选择标记：旨在筛选出带有目标基因的细胞，并提高表达效率。常用的选择标记

有抗生素抵抗基因和荧光标记基因等。

（4）复制起点：能够使表达载体在宿主细胞内进行自我复制，提高表达效率。

宿主细胞则是一种能够实现表达载体遗传信号转录、翻译和合成目标蛋白质的生命

体。

2.原核表达系统的工作流程

原核表达系统通过以下几个步骤来实现目标蛋白质的表达：

（1）制备表达载体

将目标基因插入表达载体中，构建成重组DNA分子。

（2）转化宿主细胞

将制备好的表达载体转化（transform）到宿主细胞内。转化过程中，表达载体通过电

击、热激或溶菌酶处理等方法，被宿主细胞吞噬并与其细胞质融合。

（3）表达基因转录和翻译

转录因子识别插入表达载体的启动子序列，调节基因在宿主细胞内能够合成被表达的

mRNA。转录后的mRNA与核糖体结合，开始翻译，合成蛋白质。

（4）目标蛋白质的后处理和纯化

将宿主细胞内表达的蛋白质从培养基或细胞酶中提取出来。通常采用离心、过滤或柱

层析等方法，对蛋白质进行分离和纯化。

3.原核表达系统的优缺点

原核表达系统在生物技术和基因工程领域应用广泛，主要因为其有以下的优缺点。

（1）优点

①高效：能够表达大量的目标蛋白质，通常能够达到10%以上的蛋白质总产量。

②简便：操作简便，不需要昂贵的设备，很容易进行规模化操作。

③成本低：与哺乳动物表达系统相比，原核表达系统的成本更低，适合大量生产需

求。

（2）缺点

①不能表达复杂蛋白：原核生物不能进行糖基化、磷酸化等修饰，因此不能表达复杂

蛋白质。

②蛋白质结构不稳定：由于缺乏复杂的后翻译修饰过程，原核表达系统所产生的蛋白

质结构往往不稳定，易于降解和失活。

③易产生内源蛋白质：原核表达系统中往往会产生大量内源蛋白质，需要进行清除才

能得到目标蛋白质。

4.小结

原核表达系统是一种重要的生物技术工具，其能够高效、简便、低成本地表达目标蛋

白质。在选择表达系统时，需要根据要表达的蛋白质的复杂性和翻译后需要的后修饰水平，

综合考虑选择最适合的表达系统。

原核表达系统还常用于筛选抗原、生产药用蛋白和工业酶、研发新药物等方面。利用

原核表达系统表达细胞毒素、重组蛋白等抗原，可以用于制备疫苗和诊断试剂；利用原核

表达系统表达生长激素、胰岛素等药用蛋白，可以用于治疗疾病；利用原核表达系统表达

葡萄糖异构酶、纤维素酶等工业酶，可以用于生产生物燃料、饲料和化学品等。

在原核表达系统的应用中，需要注意表达载体的构建和宿主细胞的选择。一般来说，

表达载体应该具备高复制数、稳定性、容易扩增等特点，同时这些特点还需要与宿主细胞

相匹配。而宿主细胞则应该具备易于转化、高表达量、低内源蛋白质含量等特点。

原核表达系统在应用过程中还需要解决一些技术难题，如纯化目标蛋白质、提高目标

蛋白质的稳定性和活性等。在实际应用中，需要结合实验者的技术经验和特定问题进行具

体优化处理，以获得最佳表达和生产效果。

原核表达系统是一种经济、高效的表达外源蛋白质的工具，在生物技术和基因工程领

域有着广泛的应用。随着生物技术的不断发展和进步，原核表达系统的应用范围也将不断

扩大。

随着基因编辑和合成生物学等技术的发展，原核表达系统也加速了其在生物体系内的

应用。利用导向进化技术对原核表达系统进行改良或优化能够使其表达目标蛋白的效率更

高，从而加快新药物或工业酶的研发过程。利用光遗传学等技术也可以将外源基因的表达

与外界刺激相联动，从而实现外源基因的定向表达和调控