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2021新冠病毒核酸检测标准操作流程

为了在当前肺炎疫情期间科学、规范、有效地开展核酸检

测工作，需要有限的硬件条件下的医疗机构进行生物安全防护。

各实验室应根据自身条件和流程，制定适宜的生物安全防护和

核酸检测方案。

一、核酸检测前的生物安全防护（工作人员个人三级防护

的穿戴）

穿戴流程：

在基因扩增实验室的清洁区（更衣区）或普通实验室的洁

净区，工作人员按顺序依次穿戴一次性帽子、医用N95口罩、

一次性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防护目镜和双

层乳胶手套，然后进入样本处理工作区域或实验室。

要点提示】

具备标准基因扩增布局条件的实验室应在清洁更衣区做好

个人三级防护。条件有限的实验室也可以在一洁净的实验室中

按流程穿戴好个人三级防护。

必须佩戴医用N95口罩。若没有医用N95口罩，可以考

虑使用普通N95/KN95口罩外加一次性外科口罩的组合方式，

但不要佩戴有呼吸阀的N95口罩。

佩戴N95口罩时需检查密闭性，通过双手按压、深呼吸、

左右转头等动作严格检查口罩是否佩戴正确。

一次性防护服已具备核酸检测的防护需求。有条件时可以

考虑加穿一次性反穿隔离衣，穿衣时需由他人协助。

穿戴整齐的工作人员应按要求尽快进入样本处理的实验区

域开展工作，严禁穿戴三级防护后再进入普通实验区域或办公

区域。

二、样本的灭活处理

操作流程：

两名完成三级防护的工作人员进入样本处理区或样本处理

专用实验室，将接收到的样本二级包装在安全柜内打开，检查

样本主是否为严格密闭。对密封袋表面进行消毒后，对送检样

本进行56℃下30分钟的灭活。灭活后的样本管需在生物安全

柜内打开最内层的，将拭子保存液混匀后进行分装和用于核酸

提取。

要点提示】

涉及高致病性病原微生物的实验室活动需由两名工作人员

完成，其中一人负责主要实验操作，一人提供必要的协助。主

操作者应避免反复多次进出安全柜。

灭活形式可以采用水浴或空气加热形式完成灭活。采用空

气加热时可适当延长灭活时间。有条件时可采用小型化设备在

安全柜内操作，减少样本进出安全柜的次数。灭活前的样本严

禁在生物安全柜外打开和操作。

应特别检查采样管是否拧紧、有无样本溢漏等情况。

每次进出安全柜时，都需要对样本管的外表面进行消毒，

以确保实验操作的安全性。为了防止意外溢洒事故的发生，应

该就近配备适量的消毒处理物品，并建议在安全柜内配备一次

性吸水台布。

在进行样本的核酸提取时，可以采用凯杰的柱提法核酸提

取试剂盒。首先需要在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的

普通试剂配制实验室中，配制裂解液和洗液1（AW1）、洗液

2（AW2）以及carrierRNA。配制好后，通过传递窗进入核酸

提取区或由工作人员送入核酸提取专用实验室。样本裂解后，

将离心柱放入1.5ml无菌EP管中，并进行洗涤和洗脱回收操

作，最后得到核酸样品，以备PCR检测使用。

在进行新冠病毒核酸检测时，需要注意新鲜裂解液的配制

应尽可能在专门的洁净区域或单独的实验室进行，并且要用分

子生物学级别的无水乙醇试剂进行配制。这些要点提示可以帮

助实验人员提高操作的准确性和安全性。

在进行向离心柱中加入裂解产物和洗液的操作时，需要非

常小心，尽量将洗头下探到离心柱内部后靠管壁加样，以避免

出现溢洒后污染到离心柱的密封圈，因为这可能会导致乙醇残

留，抑制后续PCR反应。

在从离心机中取出离心柱时，应小心操作，避免离心柱下

缘被收集管中的滤过残液污染。

加入洗液2（AW2）后的第二次空管全速离心非常关键，

能帮助充分甩离离心柱滤膜中残留的洗液2残液，确保洗脱核

酸的纯度。

在加入洗脱液时，需要小心操作，确保洗脱液尽可能覆盖

全部离心柱滤膜，充分洗脱核酸，提高核酸提取的产量。

对于手工核酸提取，可以优选使用检测试剂盒说明书推荐

的配套手工提取试剂，也可选用通用手工提取试剂。在样本处

理过程中，工作人员应随时更换新的外层乳胶手套，以保证操

作的安全性。

对于采用核酸提取仪提取核酸的操作流程，需要根据核酸

提取仪和试剂的说明书准备好提取试剂，取200μl样本上机提

取核酸，并按照要求回收提取好的核酸