组织学基本技术.pptxVIP

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内容提纲

组织的概念及研究内容

组织学技术简介

组织标本的制备

组织化学与免疫组织化学术

组织学的学习方法

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一、组织学概念及研究内容

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二、组织学技术简介

显微镜技术

组织化学术

图像分析术

细胞培养术和组织工程

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显微镜的发展史

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根据光源不同，显微镜分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光为光源，后者则以电子束为光源。

—、光学显微镜

（一）普通光学显微镜（二）荧光显微镜

（三）激光共聚焦扫描显微境（四）暗视野显微镜

（五）相差显微镜（六）偏光显微镜

（七）微分干涉差显微镜（八）倒置显微镜

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尼康E-600光学显微镜

尼康E-600光学显微镜

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尼康E800荧光显微镜

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莱卡倒置显微镜

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透射电镜

观察细胞的内部结构

观察细胞表面的立体结构

扫描电镜

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取材（约1mm3）

双重固定

（双醛固定液和四氧化锇）

树脂包埋

超薄切片

重金属染色

电镜观察

脱水

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取材（直径约0.3cm）

双重固定

（双醛固定液和四氧化锇）

脱水

干燥

喷镀

电镜扫描观察

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显微组织标本的制备有多种方法，例如：切片法

（石蜡切片和冰冻切片）、涂片法、铺片法、

磨片法等。组织学中最常用的方法是石蜡切片法。

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三、显微组织标本的制备

组织制片的意义和目的

组织标本制作的方法

组织切片标本制作的基本程序

苏木精-伊红染色的程序

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组织制片的意义和目的

组织制片技术是随着生命科学的发展而不断进步的。利用组织切片染色(staining)的方法所制出的标本显示了各种组织细胞的不同结构和形态，它们之间的相互连接及它们之中的某些化学成分的种类和含量的变化，为细胞分子学的研究提供了最直观的依据。因此，组织制片是研究医学和生物学的一个最基本和最重要的手段。

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组织标本制作的方法

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非组织切片法

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切片：用于具有一定硬度的组织，例如肝、肾等

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涂片:用于液态组织，如血液，精液和唾液。

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铺片:用于很薄的组织，如肠系膜。

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磨片:用于很坚硬的组织，如骨和牙。

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石蜡切片制作步骤

取材

固定

包埋

切片

染色

封片

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（一）取材

注意事项：

材料愈新鲜愈好，动作要迅速、准确，防止组织发生变形、自溶；

取材所用的刀和剪要锐利，避免损伤组织；

取材部位要恰当、准确，易于说明问题；

所取组织块大小要恰当，便于固定液的渗透。组织的大小以1X1X0.3cm为宜，厚度一般不超过0.5cm。

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（二）固定

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固定液的种类

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固定方法

浸透固定：将组织切成小块，直接

投入固定液中固定。

灌注固定：一般采用心脏灌注固定。

固定更加迅速、均匀。

尤其适用神经组织。

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固定注意事项

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（三）染色

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镀银染色

神经元

H.E染色

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HE染色

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细胞爬片制作

将处理好的盖玻片放入接种了细胞的培养瓶或六孔板内。

待细胞生长达到60％以上后取出玻片。

用4%的多聚甲醛固定2h以上。

可加甘油封存置于零下20℃保存。

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细胞涂片制作

离心将细胞收集出来，用预冷的PBS洗2－3遍，最后用PBS将细胞重悬。

吸取30－50ul（可根据细胞量调整）滴至处理过的载玻片上，然后涂抹均匀。

待稍微风干以后加4％多聚甲醛溶液覆盖细胞，固定2－4小时。

在细胞上加一层甘油放-20℃保存。

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四、组织化学与免疫组织化学术

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（一）一般组织化学术（Histochemistry）

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PAS反应：确定组织或细胞中有无多糖存在的一种方法。反应产物呈紫红色。

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Feulgen反应：显示DNA，呈红色。

甲基绿-派若宁反应：同时显示DNA核RNA，DNA呈蓝绿色，RNA呈红色。

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苏丹红染色：脂类物质呈红色。

冰冻切片对脂类物质保持较好。

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（二）免疫组织化学术（immunohistochemistry）

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免疫组织化学原理模式图

抗原抗体抗原抗体复合物

荧光素

辣根过氧化物酶

胶体金

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3.免疫组化技术的种类

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50

荧光标记免疫组织化学

直接法间接法