DB35T 1995-2021 禽心包积液-肝炎综合征荧光定量 PCR 诊断技术　.docxVIP

ICS11.220CCSB41

35

福建省地方标准

DB35/T1995—2021

禽心包积液-肝炎综合征荧光定量PCR诊断技术

FluorescencequantitativePCRdiagnosisoffowlhydropercardium-hepatitissyndrome

2021-08-17发布2021-11-17实施

福建省市场监督管理局发布

DB35/T1995—2021

I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4疫病概述 1

5设备、材料和试剂 2

6样品的采集、保存和处理 2

7样品中病毒DNA提取 3

8荧光定量PCR操作步骤 3

9结果判定 3

10测序 4

附录A（规范性）试剂的配制及引物序列 5

附录B（资料性）扩增产物参考基因序列和荧光定量PCR扩增曲线图 6

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II

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由福建省农业科学院提出。

本文件由福建省农业农村厅归口。

本文件起草单位：福建省农业科学院畜牧兽医研究所、福州海关技术中心。

本文件主要起草人：施少华、陈珍、陈翠腾、叶洪、张体银、郑腾、黄瑜、朱春华、傅光华、程龙飞、万春和、彭春香、刘荣昌、陈红梅、傅秋玲。

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1

禽心包积液-肝炎综合征荧光定量PCR诊断技术

1范围

本文件规定了禽心包积液-肝炎综合征荧光定量PCR诊断技术的设备、材料和试剂，样品的采集、处理和保存，样品中病毒DNA的提取，荧光定量PCR操作步骤及结果判定的技术要求。

本文件适用于禽心包积液-肝炎综合征的分子生物学诊断及流行病学监测。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

禽心包积液-肝炎综合征fowlhydropercardium-hepatitissyndrome；HHS由禽腺病毒4型引起禽类的以心包积液、肝炎为特点的一种综合征。

3.2

禽腺病毒4型fowladenovirusserotype4；FAdV-4引起禽心包积液-肝炎综合征的病原。

3.3

循环阈值cyclethreshold；Ct值

荧光定量PCR反应中每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

4疫病概述

禽心包积液-肝炎综合征（HHS），最早于1987年发生于巴基斯坦安卡拉地区。目前，该病呈现世界范围分布，多个国家、地区相继报道该病的发生，各地分离到的毒株略有差异，但大多为FAdV-4，且具有很强的致病性。2010年以来，我国多地发生了HHS，并从发病鸡群中分离到FAdV-4。该病主要临床特征为心包充盈，心包内积有淡黄色液体或胶冻样物；肝脏呈现不同程度肿胀，质地较脆、易碎，有出血斑或出血点；肾脏肿大、质地较脆，有的呈现“花斑肾”。该病主要发生于3～5周龄肉鸡，10～20周龄蛋鸡偶有发生，有报道鸭、鹅、鸽及野鸟也可发生该病。发病鸡在4d后开始死亡，死亡期可持续7d~10d，发病率和病死率分别为10%～30%和20%～75%。该病一年四季均可发生，以水平传播为主，也可垂直传播，感染鸡排毒期可长达9周，发病日龄越早，死淘率越高。

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2

5设备、材料和试剂

5.1设备

5.1.1台式冷冻高速离心机（转速应＞12000r/min）。

5.1.2水浴锅或金属浴。

5.1.3微量可调移液器（量程分别为100μL～1000μL、20μL～200μL、2μL～20μL、0.5μL~10μL）。

5.1.4荧光定量PCR仪。

5.1.5旋涡混合仪

5.2材料和试剂

5.2.1棉拭子稀释液：配比按照附录A的A.1。

5.2.2组织稀释液：配比按照附录A的A.2。

5.2.310%SDS溶液：配比按照附录A的A.3。

5.2.43mol/L醋酸钠缓冲液（pH5.2）：配比按照附录A的A.4。

5.2.575%乙醇：配比