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方法验证报告
项目名称：生活饮用水总大肠菌群的检测（滤膜法）
《生活饮用水标准检验方法第12部分：微生物指标》
方法名称：
GB/T5750.12-2023/5.2滤膜法
报告编写人：
参加人员：
审核人员：
报告日期：
1实验室基本情况
1.1人员情况
表1参加验证的人员情况登记表
姓名性别年龄职务或职称所学专业从事相关专业年限
1.2检测仪器/设备情况
表2使用仪器情况登记表
设备名称规格型号仪器出厂编号计量/检定状态
电热恒温培养箱
单人净化工作台
立式压力蒸汽灭菌器
生物显微镜
电子天平
1.3检测用试剂情况
表3使用试剂登记表
试剂名称生产厂家级别规格备注
品红亚硫酸钠培养基
乳糖蛋白胨培养液
FTQC-75-02总大肠菌
群质控样品
1.4环境设施和条件情况
实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在温度18⁓26℃，湿度
45%⁓65%的要求范围内，满足检测环境条件，实验室人员每天对环境条件进行
监控。另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措
施，符合实验室安全内务的要求。
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2实验室检测技术能力
2.1原理
用孔径为0.45um的微孔滤膜过滤水样后，将滤膜贴在选择性培养基上培养后，
能形成典型菌落，经革兰氏染色和证实试验后，来检测水中总大肠菌群的方法。
2.2试验步骤
2.2.1准备工作
2.2.1.1滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入纯水，置于沸水浴中煮沸灭菌3
次，每次15分钟。前两次煮沸后需更换纯水洗涤2-3次，以除去残留溶剂。或
使用符合要求的一次性无菌滤膜。
2.2.1.2滤器灭菌：用点燃的酒精棉球火焰灭菌。也可用高压蒸汽灭菌器121℃
高压蒸汽灭菌20min。
2.2.2过滤水样
用镊子夹取无菌滤膜边缘部分，将粗糙面朝上，贴放在已灭菌的滤床上，固定
好滤器，将100ml水样（如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀
4
释）注入滤器中，打开滤器阀门，在-5.07×10pa（-0.5大气压）下抽滤。
2.2.3培养
过滤完水样后再抽气5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘
部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面朝上，滤膜应与培养基
完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将培养皿倒置，放入恒温培养箱内，（36
±1）℃培养24h±2h。
2.2.4试验数据处理
2.2.4.1挑取紫红色且具有金属光泽的菌落、深红色不带或略带金属光泽的菌
落和淡红中心色较深的菌落进行革兰氏染色镜检。凡革兰氏染色为阴性的无芽
孢杆菌，再接种乳糖蛋白胨培养液，于（36±1）℃培养24h±2h，有产酸内产
气者，则判定为总大肠菌群阳性。
2.2.4.2按下面公式计算滤膜上生长的总大肠菌群数，以每100ml水样中的总
大肠菌群菌落数（CFU/100ml)报告结果。
数出的总大肠菌群菌落数100
总大肠菌群菌落数（CFU/100ml)=
过滤的水样体积（mL)
2.5精密度结果数据分析
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实验室对任务号为的生活饮用水样进行6次平行测定，结果见下表
测定次数检测结果（CFU/100ml）
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