DB34T 3407-2019 猪流行性腹泻病毒IgA抗体间接ELISA检测方法.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T3407—2019

猪流行性腹泻病毒IgA抗体间接ELISA检测

方法

IndirectELISAtodetectantidodyagainstporcineepidemicdiarrheavirus

2019-11-04发布2019-12-04实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T3407—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽省动物疫病预防与控制中心、安徽省动

物卫生监督所、霍邱县动物卫生监督所、广德县畜牧兽医水产局、合肥市动物疫病预防与控制中心、含

山县畜牧局、怀宁县平山镇农业站。

本标准主要起草人：潘孝成、洪功飞、沈学怀、李雪松、王扬龙、赵瑞宏、张丹俊、戴银、胡晓苗、

侯宏艳、周学利、陈曦、陈福军、钱昌银、胡业和、程志清。

I

DB34/T3407—2019

猪流行性腹泻病毒IgA抗体间接ELISA检测方法

1范围

本标准规定了猪流行性腹泻病毒IgA抗体的间接ELISA检测方法。

本标准适用于猪流行性腹泻病毒IgA抗体检测。

2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PEDV：猪流行性腹泻病毒（PorcineEpidemicDiarrheaVirus）

ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay）

HRP：辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase）

OD：光密度（OpticalDensity）

IgA：免疫球蛋白A（ImmunoglobulinA）

3主要仪器

3.137℃培养箱。

3.2酶联免疫检测仪。

3.3酶联反应板

3.4微量移液器（10µL、100µL、1000µL）和吸头。

3.5多道移液器（10µL、100µL、300µL）

3.6台式低温高速离心机

4试剂和材料

4.1PEDV纯化浓缩抗原

将第30代PEDV-HX株（TCID7.35

50=10/0.1mL）接种VERO单层细胞，接毒后72小时收集病毒

培养物（含细胞和培养液），冻融3次，加入1/10体积的聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)，室温

振荡10min，6000r/min4℃高速离心20min，收集上清液；取上清液45000r/min4℃超速离心120

min。弃去上清液，沉淀用0.01mol/LpH为7.4的PBS充分溶解（PBS使用量按原来病毒培养物体

积的1/20），即为PEDV纯化浓缩抗原（测得蛋白浓度为3.8mg/mL）。

4.2酶结合物

商品化的HRP标记的抗猪IgA抗体，工作浓度参照产品说明书。

4.3标准阳性乳汁

PEDV疫苗免疫健康猪制备，经琼扩法测抗体效价≥1:64。