光果甘草根提取物的真伪鉴别 高效液相色谱法.docxVIP

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光果甘草根提取物的真伪鉴别高效液相色谱法

1范围

本文件描述了光果甘草根提取物（主要为光甘草定40%，不适用于高浓度光甘草定，其他药材的适用度未考察过，若药材中含有本方法中所检测的物质，可以参考使用。）中黄酮类标志物光甘草定、芒柄花黄素，三萜类标志物甘草酸、光甘草醇、甘草内酯含量的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于甘草提取粉末中光甘草定、芒柄花黄素、甘草酸、光甘草醇、甘草内酯含量的测定，其他固体、半固体植物提取物可参照执行。本方法通过对潜在的廉价甘草提取物和光果甘草根提取物Glabridin-40中的主要功效成分和含量测定，实现光果甘草根提取物Glabridin-40真伪鉴定，保障消费者权益。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经甲醇超声提取，过滤，续滤液中各物质经液相色谱柱分离后，用紫外检测器进行检测，用保留时间进行定性，外标法定量。

5试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。

5.2乙腈（C2H3N，CAS号：75-05-8）：色谱纯。

5.3磷酸（H3PO4，CAS号：7664-38-2），分析纯。

5.40.05%磷酸水溶液：取500μL磷酸（5.1），加一级水定容至1L。

5.5标准物质：

光甘草定标准物质（Glabridin，C20H20O4，CAS号：59870-68-7），纯度≥98%。

芒柄花黄素标准物质（Formononetin，C16H12O4，CAS号：485-72-3），纯度≥98%。甘草酸标准物质（Glycyrrhizicacid，C42H62O16，CAS号：1405-86-3），纯度≥98%。

光甘草醇标准物质（Glabrol，C25H28O4，CAS号：59870-65-4），纯度≥98%。

甘草内酯标准物质（Glabrolide，C30H44O4，CAS号：10401-33-9），纯度≥98%。

5.6标准储备液（1000mg/L）：准确称取10mg（精确至0.1mg）标准物质（5.3），用甲醇（5.1）溶

解并定容到10mL，混合均匀。标准储备液避光于≤4℃下储存，有效期2个月。

标准工作溶液：

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芒柄花黄素标准工作溶液：分别吸取适量的芒柄花黄素标准储备液（5.4）至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL的标准工作溶液（可根据样品含量适当调节溶液的浓度），临用现配。

光甘草定、甘草酸、光甘草醇、甘草内酯标准工作液：分别吸取适量的光甘草定、甘草酸、甘草内酯、光甘草醇标准储备液（5.4）至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L、1000mg/L、1200mg/L的标准工作溶液（可根据样品含量适当调节溶液的浓度），临用现配。

5.8：实验材料：离心管、烧杯、量筒、移液枪、注射器、微孔滤膜（孔径0.22μm，有机系）。

6仪器和设备

6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器（或二极管阵列检测器）。

6.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。

6.3超声波清洗器。

6.4高速离心机：转速不低于8000r/min。

7测定步骤

7.1样品预处理

精密称取0.5g（精确至0.01）甘草提取物粉末于50mL离心管中，加入25mL甲醇充分溶解，称量。在超声水浴温度25℃条件下超声提取30min，冷却至室温后称量，用甲醇补足余量，避光储存，以4000r/min离心5min，取上清液过0.22μm微孔滤膜，取续滤液为供试品溶液。

7.2液相色谱参考条件

7.2.1色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），或性能相当者。

7.2.2柱温：35℃。

7.2.3流动相：乙腈、0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱。

7.2.4洗脱程序：

（1）检测光甘草定、芒柄花黄素